مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بتركيز 2× (مع صبغة) HYA442
يحتوي مزيج التفاعل الرئيسي 2× PCR على إنزيم بوليميراز الحمض النووي Taq، والنيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs)، ومكونات أخرى ضرورية لتفاعل PCR. يتميز هذا المزيج بثباته لمدة ثلاثة أشهر عند درجة حرارة 4 مئوية بفضل مثبتاتنا المصممة خصيصًا. تم تحسين محلول المزيج المسبق لتفاعل PCR التقليدي، وهو جاهز للاستخدام بمجرد إضافة قالب الحمض النووي والبادئات. يمكن تحميل نواتج تفاعل PCR مباشرةً في الرحلان الكهربائي باستخدام صبغة بروموفينول الأزرق المحملة مسبقًا. تحتوي النواتج المُضخمة على نتوء 3'-dA، ويمكن استنساخها بسهولة في ناقل T. يُبسط مزيج التفاعل الرئيسي 2× PCR إجراء تفاعل PCR ويقلل من التلوث.
عناصر
| عناصر | المقاس-1 | المقاس 2 | المقاس 3 |
| مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل 2× (مع صبغة) | 5 مل | 1 مل × 15 | 1 مل × 50 |
تخزين
يُحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة سنتين.
تعليمات
1. نظام التفاعل
| عناصر | مقدار |
| مزيج تفاعل البوليميراز المتسلسل 2× (مع صبغة) | 25 ميكرولتر |
| البادئ الأمامي (10 ميكرومتر) | 2 ميكرولتر |
| البادئ العكسي (10 ميكرومتر) | 2 ميكرولتر |
| قالب الحمض النووي* | عامل |
| ddH2ال | حتى 50 ميكرولتر |
*استخدام القالب: 50-200 نانوغرام من الحمض النووي الجينومي؛ 0.1-10 نانوغرام من الحمض النووي البلازميد
2. برنامج التفاعل
| خطوة | درجة حرارة | وقت | دورات |
| التمسخ الأولي | 94 درجة مئوية | 5 دقائق | 1 |
| التمسخ | 94 درجة مئوية | 30 ثانية | 35 |
| التلدين | 50-60 درجة مئوية | 30 ثانية | |
| امتداد | 72 درجة مئوية | 30-60 ثانية/كيلوبايت | |
| التمديد النهائي | 72 درجة مئوية | 10 دقائق | 1 |
| يمسك | 4 درجة مئوية | - | 1 |
1. المغنيسيوم2+ التركيز: يحتوي هذا المنتج على 3 ملي مول من كلوريد المغنيسيوم2، مناسب لمعظم تفاعلات PCR.
٢. درجة حرارة التلدين: يُرجى الرجوع إلى قيمة Tm النظرية للبادئات. يمكن ضبط درجة حرارة التلدين بحيث تكون أقل بمقدار ٢-٥ درجات مئوية من القيمة النظرية للبادئة.
3. مدة التمديد: يُوصى باستخدام 30 ثانية/كيلوبايت لتحديد الهوية الجزيئية. ويُوصى باستخدام 60 ثانية/كيلوبايت لاستنساخ الجينات.
ملحوظات
1. منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التي تحتوي على مزيج رئيسي لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR Master Mix) بتركيز 2× غير مناسبة للفصل الكهربائي على هلام البولي أكريلاميد.
2. من أجل سلامتك وصحتك، يرجى ارتداء معاطف المختبر والقفازات التي تستخدم لمرة واحدة أثناء العملية.
3. يُستخدم لأغراض البحث فقط!