2× Premiscela PCR (cù Colorante) HYA442
2× PCR Master Mix cuntene Taq DNA Polimerasi, dNTP, è altri cumpunenti richiesti per a PCR. U Master Mix hè stabile per 3 mesi à 4℃ cù i nostri stabilizzatori persunalizati. A suluzione di premiscela hè ottimizzata per a PCR cunvinziunale è pronta à l'usu aghjunghjendu un mudellu di DNA è primer. I prudutti PCR ponu esse caricati direttamente per l'elettroforesi cù un colorante blu bromofenolo precaricatu. I prudutti amplificati cuntenenu una protrusione di 3'-dA è ponu esse facilmente clonati in u vettore T. U Master Mix 2× PCR simplifica a prucedura PCR è riduce a contaminazione.
Cumponenti
| Cumponenti | Taglia-1 | Taglia-2 | Taglia-3 |
| 2× Premiscela PCR (cù Colorante) | 5 ml | 1 mL × 15 | 1 mL × 50 |
almacenamentu
Conservà à -20°C per 2 anni.
Istruzzioni
1. Sistema di Reazione
| Cumponenti | Volume |
| 2× Premiscela PCR (cù Colorante) | 25 µL |
| Primer in avanti (10 μM) | 2 µL |
| Primer inversu (10 μM) | 2 µL |
| Template di DNA* | Variabile |
| ddH2U | Finu à 50 µL |
* Utilizazione di mudelli: 50-200 ng DNA genomicu; 0,1-10 ng di DNA plasmidico
2. Prugramma di Reazione
| Passu | Temperatura | Tempu | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 94 ℃ | 5 minuti | 1 |
| Denaturazione | 94 ℃ | 30 secondi | 35 anni |
| Ricottura | 50-60 ℃ | 30 secondi | |
| Estensione | 72 ℃ | 30-60 sec/kb | |
| Estensione Finale | 72 ℃ | 10 minuti | 1 |
| Tene | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ cuncentrazione: Stu pruduttu cuntene 3 mM di MgCl2, adattatu per a maiò parte di e reazioni PCR.
2. Temperatura di ricottura: Per piacè riferitevi à u valore teoricu Tm di i primer. A temperatura di ricottura pò esse impostata à 2-5 ℃ inferiore à u valore teoricu di u primer.
3. Tempu di estensione: Per l'identificazione moleculare, si cunsiglianu 30 sec/kb. Per a clonazione di geni, si cunsiglianu 60 sec/kb.
Note
1. I prudutti PCR cù 2× PCR Master Mix ùn sò micca adatti per l'elettroforesi in gel di poliacrilamide.
2. Per a vostra sicurezza è salute, portate camici di laburatoriu è guanti monousu per l'operazione.
3. Hè adupratu SOLAMENTE per a ricerca!