Kit Magneticu Universale di DNA/RNA Virale HYD521
U Kit Magnetic Universal Viral DNA/RNA hè adattatu per l'estrazione di l'acidu nucleicu virale da u sangue interu o da fluidi corporei senza cellule (cum'è serum, plasma, fluidu cerebrospinale, tamponi nasali/faringei, fluidu di lavaggio alveolare, ecc.). Stu metudu usa a tecnulugia di purificazione cù perle magnetiche, è ùn hè necessaria alcuna estrazione di cloroformiu di fenolu tossicu durante u prucessu di estrazione. Hè sicuru, micca tossicu è veloce. U pruduttu ottenutu pò esse adupratu direttamente in PCR, qPCR, sequenziamentu di seconda generazione è altri esperimenti. Quandu hè adupratu cù strumenti di estrazione automatizati cù perle magnetiche, si pò ottene una estrazione à altu rendimentu di l'acidi nucleichi.
Infurmazioni nantu à u pruduttu
| Cumponenti | 48T |
| Soluzione di lisi è di legame | 33 millilitri |
| Suspensione di perle magnetiche | 1,1 mL |
| Tampone di lavaggio A | 40 ml |
| Tampone di lavaggio B | 80 ml |
| Soluzione di eluzione | 10 mL |
| Proteinasi K | 1,1 mL |
Cundizioni di almacenamentu
A proteinasi K deve esse cunservata à 2 ~ 8 ℃ è l'altri ingredienti devenu esse cunservati à temperatura ambiente. A durata di conservazione hè di 18 mesi.
Descrizzione di u campione
1. Tipi di campioni applicabili: sangue interu, serum, plasma, fluidu cerebrospinale, tamponi nasali/faringei, fluidu di lavaggio alveolare è altri campioni.
2. Conservazione è trasportu di campioni: I campioni ponu esse aduprati per i testi immediatamente o conservati à -70 ℃ o menu per i testi. U periodu di conservazione hè di 6 mesi. Si deve evità a congelazione è u scongelamentu ripetuti. I campioni sò trasportati per catena di u fretu.
3. Requisiti di congelazione-scongelazione: Congelazione è scongelazione rapida, evitate congelazioni è scongelazioni ripetute.
Operazione
Prima di l'esperimentu, verificate s'ellu ci hè precipitazione in a suluzione è s'ellu si ponu rimette in sospensione e perle magnetiche.
1. Trasferite 200~300 μL di campione in una provetta di centrifuga di 1,5 mL, aghjunghjite 600 μL di Soluzione di Lisi è Legame, 20 μL di Proteinasi K è 20 μL di sospensione di perle magnetiche in sequenza, è vortexate à alta velocità per 30 secondi. Incubate à 50 ℃ per 5~7 minuti. Se u termostatu ùn hà micca una funzione d'oscillazione, vortexate 3 volte durante u periodu d'incubazione, ogni volta per 15 secondi.
2. Trasferite à un supportu magneticu di 1,5 mL per a separazione magnetica finu à chì a suluzione sia chjara è trasparente, è scartate a suluzione.
3. Aghjunghjite 700 μL di tampone di lavaggio A, vortexate per 10 secondi per rompe e perle magnetiche, è poi trasferite in un supportu magneticu per a separazione magnetica finu à chì a soluzione sia chjara, è scartate a soluzione.
4. Aghjunghje 700 μL di tampone di lavaggio B, vortexà per 10 s per rompe e perle magnetiche, trasferisce in un supportu magneticu per a separazione magnetica finu à chì a soluzione sia chjara, è scartà a soluzione.
5. Aghjunghjite torna 700 μL di tampone di lavaggio B, vortexate per 10 s per rompe e perle magnetiche, trasferite in un supportu magneticu per a separazione magnetica finu à chì a soluzione sia chjara, è scartate a soluzione.
6. Centrifugà brevemente per raccoglie e gocce nantu à a parete di u tubu, trasferisce nantu à un supportu magneticu per a chiarificazione è assorbe u liquidu residuale. Asciugà à l'aria per 3-5 minuti.
Nota: I residui d'etanolu inibiscenu e successive reazioni enzimatiche, dunque assicuratevi chì l'etanolu evapore cumpletamente durante l'asciugatura. Ùn asciugate micca troppu longu per evità di influenzà l'effettu di eluzione successivu.
7. Aghjunghje 40~100 μL di suluzione d'eluzione, vortexà à alta velocità per 2~3 minuti per rompe e perle magnetiche. Incubà à 60 ℃ per 5 minuti, poi vortexà à alta velocità per 60 s.
8. Centrifuga istantanea per raccoglie u liquidu da u tappu di u tubu è trasferiscelu à u rack magneticu finu à chì e perle magnetiche sianu cumpletamente adsorbite. Dopu, trasferisce cù cura u liquidu in un novu tubu di centrifuga per ottene a suluzione di acidu nucleicu.
9. A suluzione d'acidu nucleicu pò esse cunservata à -20 °C per a cunservazione à cortu termine è à -80 °C per a cunservazione à longu termine.
Note
1. I diversi buffer in questu kit cuntenenu sali di guanidina. Per a vostra sicurezza è salute, portate un camisgiu di laburatoriu è guanti dispunibili. È manipulate secondu e precauzioni standard di sicurezza. Ùn lasciate micca chì u buffer entri in cuntattu cù a pelle, l'ochji è e membrane mucose. S'ellu succede, lavate subitu cù acqua abbondante è cunsultate un medicu.
2. Sè a suluzione precipita, ci vole à bagnà la in acqua à 30 ℃ finu à chì u precipitatu sia cumpletamente dissoltu prima di l'usu.
3. Sè a sospensione di perle magnetiche hè congelata, ùn l'utilizate micca.
4. I diversi buffer in questu kit cuntenenu sali di guanidina. Ùn aduprate micca disinfettanti ossidanti cum'è l'ipocloritu di sodiu per trattà li, altrimenti saranu liberati gas tossichi è devenu esse trattati cum'è rifiuti medichi.
5. Ci ponu esse perle magnetiche residue durante l'eluzione. Pruvate à evità d'inalà e perle magnetiche quandu aspirate i campioni.