Magnetická univerzální sada pro virovou DNA/RNA HYD521
Sada Magnetic Universal Viral DNA/RNA je vhodná pro extrakci virové nukleové kyseliny z plné krve nebo tělních tekutin bez buněk (jako je sérum, plazma, mozkomíšní mok, výtěry z nosu/hltanu, tekutina z alveolární laváže atd.). Tato metoda využívá technologii magnetické purifikace kuličkami a během extrakčního procesu není nutná extrakce toxickým fenol-chloroformem. Je bezpečná, netoxická a rychlá. Získaný produkt lze přímo použít v PCR, qPCR, sekvenování druhé generace a dalších experimentech. Při použití s automatickými extrakčními přístroji s magnetickými kuličkami lze dosáhnout vysoce výkonné extrakce nukleových kyselin.
Informace o produktu
| Součásti | 48T |
| Roztok pro lýzu a vázání | 33 ml |
| Magnetické zavěšení kuliček | 1,1 ml |
| Promývací pufr A | 40 ml |
| Promývací pufr B | 80 ml |
| Eluční roztok | 10 ml |
| Proteináza K | 1,1 ml |
Podmínky skladování
Proteináza K by měla být skladována při teplotě 2~8 °C a ostatní složky by měly být skladovány při pokojové teplotě. Trvanlivost je 18 měsíců.
Ukázkový popis
1. Použitelné typy vzorků: plná krev, sérum, plazma, mozkomíšní mok, výtěry z nosu/hltanu, tekutina z alveolární laváže a další vzorky.
2. Skladování a přeprava vzorků: Vzorky lze k testování použít ihned nebo je skladovat při teplotě -70 °C nebo nižší. Doba skladování je 6 měsíců. Je třeba se vyhnout opakovanému zmrazování a rozmrazování. Vzorky se přepravují chladicím řetězcem.
3. Požadavky na zmrazování a rozmrazování: Rychlé zmrazování a rozmrazování, vyhněte se opakovanému zmrazování a rozmrazování.
Operace
Před experimentem zkontrolujte, zda se v roztoku vysrážela sraženina a zda lze magnetické kuličky resuspendovat.
1. Do 1,5ml centrifugační zkumavky přeneste 200–300 μl vzorku, postupně přidejte 600 μl lyzačního a vazebného roztoku, 20 μl proteinázy K a 20 μl suspenze magnetických kuliček a míchejte na vortexu vysokou rychlostí po dobu 30 sekund. Inkubujte při 50 °C po dobu 5–7 minut. Pokud termostat nemá funkci oscilace, míchejte na vortexu 3krát během inkubační doby, pokaždé po dobu 15 sekund.
2. Přelijte do 1,5ml magnetického stojanu pro magnetickou separaci, dokud roztok nebude čirý a průhledný, a poté roztok zlikvidujte.
3. Přidejte 700 μl promývacího pufru A, míchejte 10 sekund na vortexu, aby se rozbily magnetické kuličky, a poté přeneste do magnetického stojanu pro magnetickou separaci, dokud roztok nebude čirý, a roztok zlikvidujte.
4. Přidejte 700 μl promývacího pufru B, míchejte na vortexu po dobu 10 s, aby se magnetické kuličky rozbily, přeneste do magnetického stojanu pro magnetickou separaci, dokud roztok nebude čirý, a roztok zlikvidujte.
5. Znovu přidejte 700 μl promývacího pufru B, míchejte 10 s na vortexu, aby se magnetické kuličky rozbily, přeneste do magnetického stojanu pro magnetickou separaci, dokud roztok nebude čirý, a roztok zlikvidujte.
6. Krátce centrifugujte, aby se na stěně zkumavky shromáždily kapky, přeneste je na magnetický stojan k vyčeření a absorbujte zbývající kapalinu. Nechte 3–5 minut sušit na vzduchu.
Poznámka: Zbytky etanolu inhibují následné enzymatické reakce, proto se ujistěte, že se etanol při sušení zcela odpaří. Nesušte příliš dlouho, abyste neovlivnili následný eluční účinek.
7. Přidejte 40~100 μl elučního roztoku a míchejte na vortexu vysokou rychlostí po dobu 2~3 minut, aby se magnetické kuličky rozbily. Inkubujte při 60 °C po dobu 5 minut a poté míchejte na vortexu vysokou rychlostí po dobu 60 sekund.
8. Okamžitě centrifugujte, abyste shromáždili kapalinu z víčka zkumavky, a přeneste ji do magnetického stojanu, dokud se magnetické kuličky zcela neadsorbují. Poté opatrně přeneste kapalinu do nové centrifugační zkumavky, abyste získali roztok nukleové kyseliny.
9. Roztok nukleové kyseliny lze skladovat při teplotě -20 °C pro krátkodobé skladování a -80 °C pro dlouhodobé skladování.
Poznámky
1. Různé pufry v této soupravě obsahují guanidinové soli. Pro vaši bezpečnost a zdraví používejte laboratorní plášť a jednorázové rukavice. A manipulujte v souladu s bezpečnostními opatřeními. Zabraňte kontaktu pufru s kůží, očima a sliznicemi. Pokud k němu dojde, okamžitě je omyjte velkým množstvím vody a vyhledejte lékařskou pomoc.
2. Pokud se roztok sráží, je třeba jej před použitím koupat ve vodě o teplotě 30 °C, dokud se sraženina zcela nerozpustí.
3. Pokud je suspenze magnetických kuliček zmrzlá, nepoužívejte ji.
4. Různé pufry v této soupravě obsahují guanidinové soli. K jejich ošetření nepoužívejte oxidační dezinfekční prostředky, jako je chlornan sodný, jinak se uvolní toxické plyny a musí být zlikvidovány jako zdravotnický odpad.
5. Během eluce mohou být zbytkové magnetické kuličky. Při odsávání vzorků se snažte magnetické kuličky vdechovat.