2× PCR-præmix (med farvestof) HYA442
2× PCR Master Mix indeholder Taq DNA Polymerase, dNTP'er og andre PCR-krævede komponenter. Master Mix er stabil i 3 måneder ved 4 ℃ med vores specialtilpassede stabilisatorer. Forblandingsopløsningen er optimeret til konventionel PCR og klar til brug ved at tilsætte DNA-skabelon og primere. PCR-produkterne kan indlæses direkte til elektroforese med præ-indlæst bromphenolblåt farvestof. De amplificerede produkter indeholder 3'-dA-fremspring og kan nemt klones ind i T-vektor. 2× PCR Master Mix forenkler PCR-proceduren og reducerer kontaminering.
Komponenter
| Komponenter | Størrelse-1 | Størrelse-2 | Størrelse-3 |
| 2× PCR-præmix (med farvestof) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Opbevaring
Opbevares ved -20°C i 2 år.
Instruktioner
1. Reaktionssystem
| Komponenter | Bind |
| 2× PCR-præmix (med farvestof) | 25 µL |
| Fremadrettet primer (10 μM) | 2 µL |
| Omvendt primer (10 μM) | 2 µL |
| DNA-skabelon* | Variabel |
| ddH2DE | Op til 50 µL |
*Skabelonbrug: 50-200 ng genomisk DNA; 0,1-10 ng plasmid DNA
2. Reaktionsprogram
| Trin | Temperatur | Tid | Cykler |
| Indledende denaturering | 94 ℃ | 5 minutter | 1 |
| Denaturering | 94 ℃ | 30 sekunder | 35 |
| Udglødning | 50-60 ℃ | 30 sekunder | |
| Udvidelse | 72 ℃ | 30-60 sek/kb | |
| Endelig forlængelse | 72 ℃ | 10 minutter | 1 |
| Holde | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ koncentration: Dette produkt indeholder 3 mM MgCl2, egnet til de fleste PCR-reaktioner.
2. Udglødningstemperatur: Se venligst den teoretiske Tm-værdi for primere. Udglødningstemperaturen kan indstilles til 2-5 ℃ lavere end primerens teoretiske værdi.
3. Forlængelsestid: Til molekylær identifikation anbefales 30 sek/kb. Til genkloning anbefales 60 sek/kb.
Noter
1. PCR-produkter med 2× PCR Master Mix er ikke egnede til polyacrylamidgelelektroforese.
2. Af hensyn til din sikkerhed og dit helbred bedes du bære laboratoriekittel og engangshandsker under arbejdet.
3. Det bruges KUN til forskningsbrug!