Magnetisches universelles virales DNA/RNA-Kit HYD521
Das magnetische Universal-Kit zur Extraktion viraler DNA/RNA eignet sich zur Gewinnung viraler Nukleinsäure aus Vollblut oder zellfreien Körperflüssigkeiten (wie Serum, Plasma, Liquor, Nasen-/Rachenabstrichen, Bronchiallavageflüssigkeit usw.). Das Verfahren basiert auf der Reinigung mit magnetischen Beads und kommt ohne toxische Phenol-Chloroform-Extraktion aus. Es ist sicher, ungiftig und schnell. Das gewonnene Produkt kann direkt für PCR, qPCR, Sequenzierung der zweiten Generation und weitere Experimente verwendet werden. In Kombination mit automatisierten Extraktionsgeräten für magnetische Beads ermöglicht es die Extraktion von Nukleinsäuren im Hochdurchsatzverfahren.
Produktinformationen
| Komponenten | 48T |
| Lyse- und Bindungslösung | 33 ml |
| Magnetische Perlenaufhängung | 1,1 ml |
| Waschpuffer A | 40 ml |
| Waschpuffer B | 80 ml |
| Elutionslösung | 10 ml |
| Proteinase K | 1,1 ml |
Lagerbedingungen
Proteinase K sollte bei 2–8 °C gelagert werden, die übrigen Zutaten bei Raumtemperatur. Die Haltbarkeit beträgt 18 Monate.
Beispielbeschreibung
1. Geeignete Probenarten: Vollblut, Serum, Plasma, Liquor cerebrospinalis, Nasen-/Rachenabstriche, alveoläre Lavageflüssigkeit und andere Proben.
2. Probenlagerung und -transport: Die Proben können entweder sofort für Tests verwendet oder bei -70 °C oder kälter gelagert werden. Die Lagerdauer beträgt 6 Monate. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden. Der Transport der Proben erfolgt unter Einhaltung der Kühlkette.
3. Anforderungen an das Einfrieren und Auftauen: Schnelles Einfrieren und Auftauen, wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.
Betrieb
Vor dem Experiment prüfen Sie, ob sich in der Lösung Ausfällungen gebildet haben und ob sich die Magnetkügelchen wieder auflösen lassen.
1. Überführen Sie 200–300 μL der Probe in ein 1,5-mL-Zentrifugenröhrchen, geben Sie nacheinander 600 μL Lyse- und Bindungslösung, 20 μL Proteinase K und 20 μL Magnetpartikelsuspension hinzu und vortexen Sie 30 Sekunden lang mit hoher Geschwindigkeit. Inkubieren Sie 5–7 Minuten bei 50 °C. Falls das Thermostat keine Oszillationsfunktion besitzt, vortexen Sie während der Inkubationszeit dreimal für jeweils 15 Sekunden.
2. Überführen Sie die Lösung in einen 1,5 ml Magnetständer zur magnetischen Trennung, bis die Lösung klar und transparent ist, und entsorgen Sie die Lösung anschließend.
3. Geben Sie 700 μL Waschpuffer A hinzu, vortexen Sie 10 Sekunden lang, um die magnetischen Kügelchen aufzubrechen, und überführen Sie die Lösung dann in einen Magnetständer zur magnetischen Trennung, bis die Lösung klar ist. Entsorgen Sie die Lösung anschließend.
4. Geben Sie 700 μL Waschpuffer B hinzu, vortexen Sie 10 s lang, um die magnetischen Kügelchen aufzubrechen, überführen Sie die Lösung in einen Magnetständer zur magnetischen Trennung, bis die Lösung klar ist, und verwerfen Sie die Lösung.
5. Erneut 700 μL Waschpuffer B zugeben, 10 s lang vortexen, um die magnetischen Kügelchen aufzubrechen, auf einen Magnetständer zur magnetischen Trennung überführen, bis die Lösung klar ist, und die Lösung verwerfen.
6. Kurz zentrifugieren, um die Tröpfchen an der Röhrchenwand zu sammeln, zur Klärung auf einen Magnetständer stellen und die restliche Flüssigkeit absaugen. 3–5 Minuten an der Luft trocknen lassen.
Hinweis: Ethanolreste hemmen nachfolgende Enzymreaktionen. Stellen Sie daher sicher, dass das Ethanol beim Trocknen vollständig verdunstet. Trocknen Sie nicht zu lange, um den nachfolgenden Elutionseffekt nicht zu beeinträchtigen.
7. 40–100 μL Elutionslösung zugeben und 2–3 min lang bei hoher Geschwindigkeit vortexen, um die Magnetpartikel aufzubrechen. 5 min bei 60 °C inkubieren, anschließend 60 s lang bei hoher Geschwindigkeit vortexen.
8. Die Flüssigkeit aus dem Röhrchenverschluss kurz zentrifugieren und auf den Magnetständer geben, bis die Magnetpartikel vollständig adsorbiert sind. Anschließend die Flüssigkeit vorsichtig in ein neues Zentrifugenröhrchen überführen, um die Nukleinsäurelösung zu erhalten.
9. Die Nukleinsäurelösung kann für die kurzfristige Lagerung bei -20 °C und für die langfristige Lagerung bei -80 °C gelagert werden.
Anmerkungen
1. Die verschiedenen Pufferlösungen in diesem Set enthalten Guanidinsalze. Tragen Sie zu Ihrer Sicherheit und zum Schutz Ihrer Gesundheit bitte einen Laborkittel und Einweghandschuhe. Beachten Sie die üblichen Sicherheitsvorkehrungen. Vermeiden Sie jeglichen Kontakt der Pufferlösung mit Haut, Augen und Schleimhäuten. Sollte dies dennoch geschehen, spülen Sie die betroffenen Stellen sofort gründlich mit Wasser ab und suchen Sie einen Arzt auf.
2. Falls sich in der Lösung ein Niederschlag bildet, muss diese vor Gebrauch in 30 °C heißem Wasser gebadet werden, bis sich der Niederschlag vollständig aufgelöst hat.
3. Sollte die magnetische Perlensuspension gefroren sein, darf sie nicht verwendet werden.
4. Die verschiedenen Pufferlösungen in diesem Set enthalten Guanidinsalze. Verwenden Sie keine oxidierenden Desinfektionsmittel wie Natriumhypochlorit zu deren Behandlung, da sonst giftige Gase freigesetzt werden und die Lösungen als medizinischer Abfall entsorgt werden müssen.
5. Es können während der Elution Reste magnetischer Kügelchen zurückbleiben. Vermeiden Sie das Einatmen magnetischer Kügelchen beim Absaugen der Proben.