2× HiFi PCR Mix para NGS HYA446
La ADN polimerasa HiFi es una polimerasa típica de la familia B con una estructura única. Es una nueva enzima similar a Pyrococcus furiosus, fusionada con un dominio de mejora de síntesis continua, que mejora la elongación, el rendimiento y la especificidad. La ADN polimerasa HiFi está equipada con anticuerpos específicos, que inhiben eficazmente la amplificación no específica y mejoran la estabilidad de la ADN polimerasa HiFi. La ADN polimerasa HiFi tiene actividad de síntesis continua 5'-3' y actividad exonucleasa 3'-5', y sus productos amplificados son de extremos romos. La ADN polimerasa HiFi es una polimerasa mutante modificada por ingeniería genética. Tiene la capacidad de incorporar dUTP y también puede amplificar plantillas complejas con dU. 2× HiFi PCR Mix para NGS es una mezcla 2X fácil de usar, que contiene 2× HiFi PCR Mix, tampón, Mg+ y dNTPs, etc. Solo se necesitan plantillas de ADN adicionales, cebadores y agua en el sistema de amplificación. Realizar la amplificación. Todos los lotes de 2× HiFi PCR Mix para NGS han sido sometidos a un estricto control de calidad para garantizar el rendimiento estable de cada lote de reactivos.
Componentes
| Componentes | Talla-1 | Tamaño-2 |
| Mezcla de PCR HiFi 2× para NGS | 24T | 96T |
Almacenamiento
Almacenar a -20℃.
Sistema de reacción
| Componentes | Envolumen |
| Mezcla de PCR HiFi 2× para NGS | 25 µL |
| ADN molde* | X uL |
| Cebador directo (20 µM)** | 2,5 µL |
| Cebador inverso (20 µM) ** | 2,5 µL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 µL |
*La plantilla de ADN se refiere al producto purificado del enlazador conectado a las microesferas magnéticas durante el proceso de construcción de la biblioteca.
**Los cebadores son los cebadores de biblioteca utilizados en el proceso de construcción de la biblioteca NGS.
Condiciones de reacción
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Predesnaturalización | 98 ℃ | 45s | 1 |
| Desnaturalización | 98 ℃ | 15 s | Número de ciclos recomendado en función de la entrada* |
| Recocido | 60 ℃ | 30 s | |
| Extensión | 72℃ | 30 s | |
| Sostener | 72℃ 4-10℃ | 1 minuto ∞ | 1 |
*Número de ciclos recomendado según la entrada:
| ADN de entrada(ADN fragmentado) | Número de ciclos de PCR |
| 1ng | 13-15 |
| 10 ng | 11-S |
| 25 ng | 7-9 |
| 50 ng | 6-7 |
| 100 ng | 5-6 |
| 250 ng | 4-5 |
| 500 ng | 3-4 |
| 1000 ng | 2-3 |
Notas
1. Se recomienda preparar todos los componentes de la reacción en hielo, ya que la actividad exonucleasa 3'-5' de la mezcla 2× HiFi PCR Mix para NGS a temperatura ambiente provocará la degradación de los cebadores;
2. Todos los componentes deben mezclarse bien y centrifugarse inmediatamente antes de su uso.
3. La polimerasa ha sido desarrollada especialmente para el sistema de preparación y amplificación de bibliotecas NGS.
4. Para la clonación y otros aspectos de la amplificación, seleccione otras enzimas de amplificación molecular.