Premezcla 5X One Step SYBR Green RT-qPCR HYA415
El premix One Step SYBR Green RT-qPCR se utiliza con SYBR Green I para PCR en tiempo real. Este producto se emplea en el método cuantitativo fluorescente RT-PCR de un paso (One Step), mediante un proceso a contracorriente dentro de la misma jurisdicción, evitando el desarrollo, la prevención efectiva del efecto y la contaminación. Este producto contiene y elimina la RTasa activa RNaseH con un tiempo de reacción a alta temperatura y un nuevo tipo de tiempo de reacción térmica, lo que aumenta la eficiencia de la PCR y es adecuado para modelos de ARN de baja concentración con alta sensibilidad. Este estudio presenta una disposición especial, una mejor disposición para qPCR y un mejor tampón para qPCR. Esta revisión ha sido proporcionada por muchos fabricantes de PCR cuantitativa fluorescente, como AppliedBiosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche, etc.
Componentes
1. Mezcla de RTasa 25× (SYBR qRT-PCR)
2. 5× Tampón de premezcla RT (SYBR qRT-PCR)
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse protegido de la luz a -20 ℃ para un almacenamiento prolongado y a 4 ℃ durante 3 meses.
Instrucciones
1. qRT-PCR RreacciónSistema
| Componentes | 25 µL Volumen | 50 µL Volumen | Concentración final |
| 5 × Tampón de premezcla RT (SYBR qRT-PCR) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| Mezcla de RTasa 25× (SYBR qRT-PCR) | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Mezcla de imprimación 25×* | 1 µL | 2 µL | 1× |
| Plantilla de ARN** | - | - | - |
| DEPC H2EL | Hasta 25 µL | Hasta 50 µL | - |
Por lo general, una concentración final de cebador de 0,2 μM puede producir buenos resultados; cuando el rendimiento de la reacción es deficiente, la concentración del cebador se puede ajustar dentro del rango de 0,2 a 1 μM.
**La cantidad recomendada de plantilla de ARN que se debe añadir está entre 10 pg y 100 ng.
2. qRT-PCR RPrograma de reacción
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Transcripción inversa | 50 ℃ | 10-20 minutos | 1 |
| Predesnaturalización | 95 ℃ | 5-10 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Recocido y extensión | 50-64℃ | 20-60 s | |
| Curva de fusión | Instrumento predeterminado | / | 1 |
* Confirme que se realiza una adquisición de señal después de cada paso de extensión. El tiempo de extensión varía según la máquina: 30 s para StepOne Plus, 31 s para 7300 y 34 s para 7500. Si no se especifica lo contrario, se utilizará el valor predeterminado de 30 s.
Técnico Información
1. El sistema se suele utilizar a 50℃, la temperatura se puede mejorar entre 42℃ y 55℃, y la mejora de la temperatura se puede producir en un plazo de 5 a 30 minutos.
2. La RTasa utilizada en el sistema de texto es la modificación básica M-MLV, tiene mayor tolerancia a la temperatura y mayor temperatura de reversión, y tiene mayor eficiencia de reversión.
3. El sistema cuenta con una buena definición, compatibilidad y es muy adecuado para la patogenicidad y la organización del ARN. Se añade un modelo a la prueba; se utiliza un modelo de baja intensidad para aumentar aún más su eficacia y, posteriormente, se emplea una prueba molecular de alta sensibilidad.
4. El método de tres pasos para aumentar la temperatura de extinción para reducir o superar una longitud de 200 pb.
5. Antes y después de su uso, se debe utilizar el dispositivo de transferencia de líquidos y se debe actualizar constantemente el procedimiento de operación del tubo de PCR; una vez finalizada la reacción de PCR, no se debe abrir el tubo, para reducir al máximo la contaminación del suelo.