endonucleasa de restricción BsaI HYJ110
La endonucleasa de restricción BsaI es una proteína mutante codificada por un gen de Bacillus stearothermophilus expresado recombinantemente en Escherichia coli. Es una endonucleasa de restricción de clase IIS que reconoce sitios específicos con la misma especificidad que la enzima nativa, pero con una actividad BsaI reducida. Su secuencia de reconocimiento y sitio de corte son los siguientes:
5'······GGTCTC(N)···············3'
3'······CCAGAG(NNNNN)······5
Componentes
| Componentes | 1KEN | 5KU | 20 KU | 200 KU | 2000KU |
| BsaI (20 U/μL) | 50 µL | 250 µL | 1 mL | 10 ml | 100 ml |
| Tampón BsaI 10× | 1,25 ml | 1,25 ml | 4 × 1,25 mL | 5 × 10 mL | 5 × 100 mL |
Almacenamiento
Conservar entre -25 °C y -15 °C. Válido durante 1 año (evitar la congelación y descongelación repetidas).
Búfer de almacenamiento
10 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 200 µg/ml de albúmina recombinante,
50% de glicerol. (pH 7,4 a 25°C).
Definición de actividad
Una unidad de actividad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir completamente 1 μg de ADN de control interno en una reacción de 50 μL a 37 °C en 1 hora.
Control de calidad
1. Pureza de la proteína (SDS-PAGE): La pureza de BsaI fue ≥95%, según lo determinado por análisis SDS-PAGE.
2. Actividad de la ARNasa:Se hicieron reaccionar 20 U de este producto con 1,6 μg de ARN MS2 a 37 °C durante 16 horas, sin que se produjera ningún cambio en la banda electroforética del ARN.
3. Actividad de DNasa inespecífica: Se hicieron reaccionar 20 U de este producto con 1 μg de ADN PhiX174 a 37 °C durante 16 horas, sin que se observaran bandas electroforéticas de ADN en exceso.
4. Ensayo de digestión-ligación-redigestión enzimática: Se digirió 1 μg de λDNA/HindIII con 20 U de este producto a 16 °C utilizando la cantidad adecuada de ADN ligasa T4. Los productos digeridos pueden volver a ligarse. Una vez recuperados los productos ligados, pueden volver a escindirse utilizando la misma endonucleasa.
5. Prueba de ADN residual de E. coli: Mediante qPCR TaqMan específica para el ADNr 16S de E. coli, se detectaron 2 U de ácido nucleico remanente en este producto, y el genoma de E. coli se mantuvo en ≤1 copia.
6. Endotoxina: Prueba LAL, Farmacopea China, edición 2020, Parte IV, Prueba de límite de gel, Reglas generales (1143), contenido de endotoxina bacteriana ≤10 UE/mg