Kit ELISA CHO HCP (ELISA de un paso) HYI111
Este kit utiliza un cultivo celular CHO (K1&S) en modo Fed-batch para producir HCP, que se utilizan para la generación de anticuerpos específicos mediante inmunización de ovejas. El kit emplea un ensayo inmunoenzimático (ELISA) de fase sólida con una técnica de sándwich de doble anticuerpo para detectar proteínas residuales de células huésped CHO (HCP) en la muestra. Se empleó un anticuerpo policlonal específico para HCP de CHO en el ensayo para capturar cualquier HCP restante en la muestra. Tanto el estándar de calibración (o muestra de prueba) como el anticuerpo anti-CHO HCP marcado con HRP (peroxidasa de rábano picante) se añadieron simultáneamente a la placa de microtitulación, que se recubrió con el anticuerpo de captura purificado por afinidad y se sometió a incubación y lavado. Luego se añadió el sustrato TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina) para la reacción, donde la HRP catalizó la oxidación del TMB por H2EL2para producir un producto azul (máximo de absorción a 655 nm). Luego se añade la solución de parada para finalizar la reacción enzimática, lo que da como resultado un producto de color amarillo (máximo de absorción a 450 nm). Los valores de absorbancia a 450 nm mostraron una correlación positiva con la concentración de HCP en el estándar de calibración y en la muestra. La concentración de CHO HCP en la muestra se puede calcular mediante la curva dosis-respuesta. No se requiere ningún tratamiento especial para la muestra de prueba y su idoneidad se puede verificar mediante las proporciones de dilución adecuadas con el kit.
Aplicaciones
Este kit está diseñado para determinar la presencia de proteínas de células huésped (PCH) en productos fabricados mediante expresión en células huésped CHO, como anticuerpos monoclonales, proteínas recombinantes, vacunas, etc. El kit es EXCLUSIVAMENTE PARA USO EN INVESTIGACIÓN y no está destinado para uso clínico.
Figura 1. Diagrama esquemático
Componentes
| Reactivo | Cantidad | Notas |
| CHO HCP Estándar de calibración | 2 botellas | Polvo liofilizado. Disuélvalo con 500 μL de solución de reconstitución y déjelo reposar durante unos 5 minutos. La solución debe quedar clara y transparente. Consulte la etiqueta del frasco para obtener más detalles. |
| HCP anti-CHO Tiras de microtitulación | 8 pocillos × 12 tiras | Tiras pre-recubiertas con anticuerpo de afinidad anti-CHO HCP de oveja en una bolsa al vacío con desecante. Sellar y almacenar inmediatamente después de su uso. |
| Solución de reconstitución | 1×1,5 mL | Se utiliza únicamente para disolver el estándar de calibración CHO HCP. |
| Diluente | 2×25 mL | Para la dilución del estándar de calibración, Anti-CHO:HRP (100×) y muestras. |
| Concentrado de tampón de lavado (10×) | 2×25 mL | Es fácil cristalizar a bajas temperaturas y puede disolverse en un baño de agua a 37 °C antes de su uso. Diluir en una proporción de 1:10 con agua ultrapura recién preparada para el lavado de placas. |
| Anti-CHO:HRP (100×) | 1×120 μL | Anticuerpo de oveja purificado por afinidad conjugado con HRP. Diluir 100 veces antes de usar. |
| Sustrato de TMB | 1×12 mL | Dejar que alcance la temperatura ambiente durante 20 minutos. minutos antes de usar. Mantener alejado de la luz y bien cerrado. |
| Solución de parada | 1×6 mL | Ácido clorhídrico 1 M. Evitar el contacto directo con los ojos, la piel y la ropa. |
| Película de sellado | 3 piezas | Cubra las tiras con este producto durante la incubación para evitar la contaminación y la evaporación del líquido. |
Nota: La temperatura ambiente se refiere a 25±3℃.
Condiciones de almacenamiento
Guarde el kit a 2-8 °C. Úselo antes de la fecha de caducidad indicada en el envase. Los componentes abiertos deben almacenarse de la siguiente manera.
Tabla 2. Condiciones de almacenamiento recomendadas para componentes abiertos.
| Componente | Estabilidad |
| Tiras de microtitulación anti-CHO HCP | Conservar en la bolsa con desecante a una temperatura de 2-8℃ durante un máximo de 60 días. |
| CHO HCP reconstituido Estándar de calibración | Almacenar a 2-8℃ durante un máximo de 30 días o por debajo de -20℃ y no más de 3 ciclos de congelación y descongelación. |
Materiales necesarios pero no incluidos en el kit.
1. Tubos de centrífuga estériles para dilución
2. Papel absorbente para el secado de platos
3. Puntas de pipeta
4. Depósitos de reactivos multicanal (50 ml)
Equipos relacionados
1. Lector de microplacas capaz de medir la absorbancia a 450 nm, con la longitud de onda de corrección ajustada entre 620 nm y 650 nm.
2. Pipetas de uno o varios canales
3. Agitador térmico de microplacas
4. Incubadora (opcional)
5. Arandela de plato (opcional)