Desoxirribonucleasa I (DNasa I), del páncreas bovino HYC118
La DNasa I es una endonucleasa que puede digerir ADN monocatenario y bicatenario para producir desoxinucleótidos simples u oligodesoxinucleótidos monocatenarios o bicatenarios. Puede hidrolizar el enlace fosfodiéster para producir monodesoxinucleótidos y oligodesoxinucleótidos que contienen grupos 5'-fosfato y grupos 3'-OH. El producto de digestión promedio es el politetranucleótido más pequeño. La DNasa I puede catalizar muchas formas de ADN, como ADN monocatenario, ADN bicatenario e incluso cromatina (su velocidad de corte se ve afectada por las histonas). El rango de pH óptimo es 7-8. La actividad de la DNasa I depende del Ca²⁺.+ y puede activarse mediante iones metálicos divalentes, como el Co2+, Mn²+, Zn²+, etc. 5 mM Ca²+ puede proteger la enzima de ser hidrolizada. En presencia de Mg²+, la enzima puede reconocer y cortar cualquier sitio en cualquier hebra de ADN de forma aleatoria; y en presencia de Mn²+Puede reconocer dos hebras de ADN al mismo tiempo y cortarlas casi en el mismo sitio para formar extremos romos o extremos cohesivos con 1-2 nucleótidos sobresaliendo. La DNasa I se aisló por primera vez del páncreas, y el páncreas de mamíferos sigue siendo una fuente importante de la enzima. Este producto se deriva del páncreas bovino y consta de cuatro componentes cromatográficamente distintos A, B, C y D en una proporción molar de 4:1:1, siendo el componente D muy pequeño. Se usa frecuentemente en experimentos de biología molecular para eliminar el ADN de las proteínas o para crear huecos en el ADN que permitan la inserción de bases marcadas en el ADN. Este producto se suministra como un polvo liofilizado que contiene cloruro de calcio con una actividad enzimática de ≥2000 unidades Kunitz/mg de proteína.
Componentes
| Componentes | Talla-1 | Talla 2 |
| Desoxirribonucleasa I (DNasa I), del páncreas bovino | 15 A | 10 × 15 KU |
Almacenamiento
Almacenar a -15 °C ~ -25 °C durante 2 años.
Definición de unidad
En condiciones de 25 °C y pH 5,0, la DNasa cataliza el ADN, y el cambio en ΔA260 por ml por minuto de aumento de 0,001 se define como una unidad de actividad enzimática (unidad Kunitz).
Especificación
| CAS No. | 9003-98-9 |
| Peso molecular | ~31 kDa |
| Unidades Kunitz | ≥2000 Unidades Kunitz/mg de proteína |
| Tipo | Tipo IV |
| pH óptimo | 7～8 |
| Apariencia | Polvo liofilizado de color blanco a marrón claro |
| Pureza | Proteína: ≥80% según Biuret |
| Solubilidad | Solución de NaCl 0,15 M: 5 mg/mL, incolora y transparente. |
| Activadores | Diversos iones metálicos divalentes como el Mg2+,Minnesota2+, Como2+, Co2+y Zn2+ |
| inhibidores | β-mercaptoetanol; agente quelante; SDS; actina |
| Solución de almacenamiento | Acetato de sodio 20 mM (pH 6,5), CaCl2 5 mM, PMSF 0,1 mM, glicerol al 50%. |
Inactivación o inhibición de la DNasa I
Tras añadir EDTA hasta una concentración final de 2,5 mM, calentar a 65 °C durante 10 minutos puede inactivar la DNasa I. La extracción con fenol-cloroformo también puede inactivar la DNasa I. Los quelantes de iones metálicos, los iones de zinc en concentraciones milimolares/litro, el SDS al 0,1 %, los agentes reductores como el DTT y el mercaptoetanol, y las concentraciones de sal superiores a 50-100 mM tienen efectos inhibidores significativos sobre la DNasa I.
Instrucciones
Aplicado a experimentos de extracción de proteínas, solo como referencia.
1. Sistema de reacción: Añadir solución de almacenamiento de DNasa I a 1/100 del volumen del extracto de proteína (para obtener una concentración final de 20 U/mL) y añadir 1 M de MgCl2 a 1/100 del volumen.
2. Condiciones de reacción: 37℃, 30-60 min. Continúe con los siguientes experimentos de extracción de proteínas.
Nota: Dado que el EDTA puede quelar el Ca2+y Mg2+El EDTA, necesario para la actividad enzimática, debe eliminarse de la solución inicial de lisis de proteínas; de lo contrario, reducirá la capacidad digestiva de la DNasa I.