Kit ELISA para E. coli HCP (ELISA de un paso) HYI112
Este kit emplea un ensayo inmunoenzimático de fase sólida (ELISA) con una técnica de sándwich de doble anticuerpo para detectar residuos. E. coli(cepas de expresión de proteínas) proteínas de la célula huésped (HCP) en la muestra. Anticuerpo policlonal específico para E. coli (cepas de expresión de proteínas) HCP se empleó en el ensayo para capturar cualquier HCP restante en la muestra. Tanto el estándar de calibración (o muestra de prueba) como la HRP (peroxidasa de rábano picante) marcada con anti-E. coli (Cepas de expresión de proteínas) El anticuerpo HCP se añadió simultáneamente a la placa de microtitulación pre-recubierta, seguido de pasos de incubación y lavado. Luego se añadió el sustrato TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina) para la reacción, HRP catalizó la oxidación de TMB por H2EL2para producir un producto azul (pico de absorción máximo a 655 nm). Posteriormente se añade la solución de parada para finalizar la reacción enzimática, lo que da como resultado un producto de color amarillo (pico de absorción máximo a 450 nm). Los valores de absorbancia a una longitud de onda de 450 nm se correlacionaron positivamente con la concentración de HCP en el estándar de calibración y la muestra. La concentración deE. coliLa expresión de proteínas en la muestra se puede calcular mediante la curva dosis-respuesta. No se requiere ningún tratamiento especial para la muestra y su idoneidad se puede verificar mediante las diluciones adecuadas, utilizando este kit.
Aplicaciones
Este kit está diseñado para determinar la presencia de proteínas de células huésped (HCP) en productos fabricados mediante expresión en E. coli derivada de BL21, tales como interleucina (IL), interferón humano recombinante (rhIFN), factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos humano recombinante (rhGM-CSF), factor de necrosis tumoral humano recombinante (rhTNF), factor promotor del crecimiento (EGF/FGF/PDGF), entre otros. El kit es EXCLUSIVAMENTE PARA USO EN INVESTIGACIÓN y no está destinado para uso clínico.
Figura 1. Diagrama esquemático
Componentes&Condiciones de almacenamiento
| Reactivo | Cantidad | Notas |
| E. coli HCP-E Estándar de calibración | 2 botellas | Polvo liofilizado. Disuélvalo con 500 μL de solución de reconstitución y déjelo reposar durante unos 5 minutos hasta que se vuelva transparente. Consulte los detalles en la etiqueta del tubo. |
| Anti-E. coli HCP-E Tiras de microtitulación | 8 pocillos × 12 tiras | Tiras pre-recubiertas con anticuerpo de afinidad HCP de oveja anti-E. coli (cepas de expresión de proteínas) en una bolsa al vacío con desecante. Sellar y almacenar inmediatamente después de su uso. |
| Solución de reconstitución | 1×1,5 mL | Utilizado únicamente para disolver el estándar de calibración E. coli HCP-E. |
| Diluente | 2×25 mL | Para la dilución del estándar de calibración, Anti-E.coli-E:HRP (100×) y muestras. |
| Concentrado de tampón de lavado (10×) | 2×25 mL | Se cristaliza fácilmente a bajas temperaturas y se redisuelve en un baño de agua a 37 ℃ antes de su uso. Diluir 10 veces con agua ultrapura recién preparada para el lavado de placas. |
| HCP-E:HRP anti-E. coli (100×) | 1×120 μL | Los anticuerpos de oveja purificados por afinidad y conjugados con HRP deben diluirse 100 veces en diluyente. |
| Sustrato de TMB | 1×12 mL | Dejar que alcance la temperatura ambiente durante 20 minutos antes de usar. Mantener bien cerrado y protegido de la luz. |
| Solución de parada | 1×6 mL | Ácido clorhídrico 1 M. Evite el contacto directo con los ojos, la piel y la ropa. Use gafas protectoras durante su manipulación. |
| Película de sellado | 3 piezas | Cubra las tiras con este producto durante la incubación para evitar la contaminación y la evaporación del líquido. |
Nota: La temperatura ambiente se refiere a 25±3℃.
Condiciones de almacenamiento
Guarde el kit a 2-8 °C. Úselo antes de la fecha de caducidad indicada en el envase. Los componentes abiertos deben almacenarse de la siguiente manera.
Tabla 2. Condiciones de almacenamiento recomendadas para componentes abiertos.
| Componente | Estabilidad |
| Anti-E. coli HCP-E Tiras de microtitulación | Conservar en la bolsa con desecante a una temperatura de 2-8℃ durante un máximo de 60 días. |
| Reconstituido E. coli HCP-E Estándar de calibración | Conservar a 2-8℃ durante un máximo de 30 días. |
Materiales necesarios no incluidos en el kit.
1. Tubos de centrífuga estériles para dilución
2. Papel tisú limpio para secar los platos.
3. Puntas de pipeta
4. Depósitos de reactivos multicanal (50 ml)
5. Agitador térmico de microplacas
6. Incubadora (opcional)
7. Arandela de placa (opcional)
Equipos relacionados
1. Lector de microplacas capaz de medir la absorbancia a 450 nm, con la longitud de onda de corrección ajustada entre 620 nm y 650 nm.
2. Pipetas monocanal o multicanal