Kit ELISA HEK293 HCP (ELISA de un paso) HYI110
Este kit utiliza un ensayo inmunoenzimático de fase sólida (ELISA) con una técnica de sándwich de doble anticuerpo para detectar proteínas residuales de células huésped (HCP) de células HEK293 en la muestra. Se empleó un anticuerpo policlonal específico para las HCP de HEK293 en el ensayo para capturar cualquier HCP restante en la muestra. Tanto el estándar de calibración (o muestra de prueba) como el anticuerpo anti-HCP de HEK293 marcado con HRP (peroxidasa de rábano picante) se añadieron simultáneamente a la placa de microtitulación, que se recubrió con el anticuerpo de captura purificado por afinidad y se sometió a incubación y lavado. Luego se añadió el sustrato TMB (3,3',5,5'-tetrametilbencidina) a la reacción, donde la HRP catalizó la oxidación del TMB por H2EL2 para producir un producto azul (máximo de absorción a 655 nm). Luego se añadió la solución de parada para finalizar la reacción enzimática, obteniéndose un producto de color amarillo (máximo de absorción a 450 nm). Los valores de absorbancia a 450 nm mostraron una correlación positiva con la concentración de HCP en el estándar de calibración y en la muestra. La concentración de HCP en la muestra se puede calcular mediante la curva dosis-respuesta. No se requiere ningún tratamiento especial para la muestra de prueba, y su idoneidad se puede verificar mediante las diluciones adecuadas con el kit.
Preparación
A. Equilibrio
1. Antes de usar, deje que el kit se equilibre a temperatura ambiente durante 20 minutos; vuelva a calentarlo a 2-8 ℃ después de usarlo.
2. Coloque la cantidad adecuada de tiras en un soporte para tiras según el diseño del experimento y guarde las tiras restantes en la bolsa con desecante a 2-8℃.
B. Preparación de reactivos
1. Solución estándar de calibración HEK293 HCP: Pipetee 500 μL de la solución de reconstitución en el frasco que contiene la solución estándar de calibración HEK293 HCP. Invierta suavemente para mezclar y deje reposar durante 5 minutos. Guarde la solución restante en las condiciones recomendadas.
Nota: No utilice otros volúmenes de solución de reconstitución para disolver el patrón de calibración.
2. Solución tampón de lavado 1×: Diluya el concentrado de solución tampón de lavado (10×) en una proporción de 1:10 con agua ultrapura. Por ejemplo, añada 25 ml de concentrado de solución tampón de lavado (10×) a 225 ml de agua ultrapura para obtener 250 ml de solución tampón de lavado 1×. Prepárela justo antes de usar y mézclela bien. Se puede adquirir por separado.
Nota: Si el concentrado de tampón de lavado (10×) o el diluyente están turbios o contienen precipitados, calentar a 37℃ hasta que se aclare.
3. 1×Anti-HEK293:HRP: Prepare el 1×HEK293:HRP diluyendo el Anti-HEK293:HRP (100×) con el diluyente en un tubo de centrífuga estéril. Mezcle suavemente la solución y úsela inmediatamente.
Nota: El anticuerpo anti-HEK293:HRP (100×) necesita equilibrarse a temperatura ambiente durante 20 minutos y luego regresar. a 2-8℃ después de su uso.
C. Preparación de soluciones estándar de calibración
1. Prepare las soluciones estándar de calibración HEK293 HCP de acuerdo con la siguiente figura y tabla.
D. Preparación de la muestra
1. Muestras de prueba: Muestras en proceso, sustancia activa y producto farmacéutico. Las muestras deben ser claras y transparentes, y las sustancias insolubles deben eliminarse mediante centrifugación o filtración.
2. Realice estudios de estabilidad de la muestra para prevenir su degradación o desnaturalización durante el experimento. Se recomienda el almacenamiento a largo plazo a -70 °C para evitar la degradación y los ciclos repetidos de congelación y descongelación.
3. Diluya las muestras con un diluyente adecuado para lograr una concentración de proteínas de células huésped (HCP) dentro del rango de cuantificación de la curva de calibración.
4. Se recomienda verificar la idoneidad de la muestra determinando el factor de dilución adecuado antes de la prueba inicial y facilitando así las pruebas rutinarias posteriores. Nota: Para obtener asistencia con el protocolo de validación, póngase en contacto con nosotros.