Polimerasa de ADN Hifi HS I HYD614
La ADN polimerasa Hifi HS I es una ADN polimerasa termoestable de alta fidelidad obtenida mediante ingeniería enzimática dirigida. Posee una actividad exonucleasa 3' a 5' extremadamente fuerte y una tasa de desajuste extremadamente baja durante la PCR. Mediante modificación con anticuerpos específicos, no presenta actividad polimerasa 5' a 3' ni actividad exonucleasa 3' a 5' a temperatura ambiente, lo que permite realizar PCR de inicio en caliente altamente específicas. El tampón contiene factores auxiliares de extensión para mantener la estabilidad y eficiencia del proceso de amplificación, facilitando la clonación de genes convencionales, la amplificación de fragmentos largos y otros experimentos.
Componentes
| Componentes | 100U | 500U | 1000U |
| Polimerasa de ADN Hifi HS I (1000 U/mL) | 100 μL | 500 μL | 500 μL × 2 |
| 5×Buffer HiFi Ⅰ | 1000 μL | 1000 μL × 5 | 1000 μL × 10 |
Almacenamiento
Conservar a -20 ℃. Mezclar bien antes de usar y evitar la congelación y descongelación repetidas.
Instrucciones
1. Preparación del sistema de reacción de PCR
| Composición | Volumen |
| Plantilla | X µL |
| Primer1 (10 µM) | 2 µL |
| Primer2 (10 µM) | 2 µL |
| 5×Buffer HiFi Ⅰ | 10 µL |
| Polimerasa de ADN Hifi HS I | 1 |
| ddH2EL | Hasta 50 |
2. procedimiento de amplificación por PCR
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| desnaturalización inicial | 95 ℃ | 3 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 98 ℃ | 10 s | 25-35 |
| Recocido | 60 ℃* | 15 s | |
| Extensión | 72 ℃ | 1 min/Kb** | |
| Totalmente extendido | 72 ℃ | 5 minutos | 1 |
| Sostener | 4 ℃ | ∞ | 1 |
*Ajuste la temperatura de recocido según el valor de Tm del imprimador; la configuración recomendada es de 60 °C.
**Al amplificar fragmentos de menos de 10 Kb, configure el tiempo en 1 min/Kb. Al amplificar fragmentos de 10 a 20 Kb, configure el tiempo total de extensión en 10 min.
Notas
1. Este producto es solo para fines de investigación científica.
2. Por favor, utilice plantillas de alta calidad.
3. La ADN polimerasa I Hifi HS está modificada con anticuerpos monoclonales. El sistema de reacción puede prepararse a temperatura ambiente, pero la enzima y el tampón deben mantenerse en hielo antes de su uso y almacenarse a -20 °C después de su uso.
4. El diseño del cebador debe cumplir con los principios generales. Si el extremo 5' tiene una secuencia modificada, es decir, una secuencia que no está emparejada con la plantilla, no se incluirá en el cálculo del valor de Tm.