Mezcla maestra de PCR Hotstart HYA444
Hotstart PCR Master Mix es un producto universal de amplificación por PCR desarrollado por nuestra empresa. Este producto utiliza una enzima de amplificación rápida de inicio en caliente, con una velocidad de amplificación ultrarrápida de 1 kb/10 s y una mayor eficiencia de extensión, lo que permite su aplicación en reacciones de PCR rápidas. Además, presenta una buena resistencia a los inhibidores de la amplificación por PCR, lo que lo hace especialmente adecuado para la detección rápida de alto rendimiento.
Componentes
2× Mezcla maestra de PCR Hotstart
*Este reactivo ya contiene componentes como enzima de arranque en caliente, tampón PCR, dNTPs, MgCl₂, estabilizadores y potenciadores.
Almacenamiento
Se puede almacenar a largo plazo a -20 °C; a 4 °C durante 3 meses. Mezclar bien antes de usar y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Sistema de reacción
| Componentes | 25uL Sistema de reacción | 50 µL Sistema de reacción |
| 2× Mezcla maestra de PCR Hotstart | 12,5 µL | 25 µL |
| 25×PrimerMix* | 1 µL | 2 µL |
| Plantilla** | -- | -- |
| ddH2EL | Hasta 25 µL | Hasta 50 µL |
*Una concentración final de cebadores de 0,2 μM suele dar resultados óptimos. Si la eficiencia de amplificación es baja, ajuste la concentración de cebadores entre 0,2 y 1,0 μM.
**El número de copias de los genes diana varía según el tipo de plantilla. Realice diluciones seriadas para determinar el volumen óptimo de plantilla para su muestra específica.
Condiciones de reacción
| Protocolo estándar de PCR | |||
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Digestión | 50℃ | 2 minutos | 1 |
| Arranque en caliente | 95 ℃ | 1-5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10-20 s | 30 |
| Recocido | 55~65℃ | 10-30 s | |
| Extensión | 72℃ | xs* | |
| RápidoProtocolo de PCR | |||
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Digestión | 50℃ | 2 minutos | 1 |
| Arranque en caliente | 95 ℃ | 1-2 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10 s | 25-30 |
| Recocido y extensión | 55~65℃ | x s* | |
*Se recomienda realizar el cálculo basándose en un tamaño máximo de fragmento de 10~20 segundos/kb.
Control de calidad
1. Pruebas funcionales: Sensibilidad, especificidad y reproducibilidad de la PCR.
2. Libre de actividad nucleasa exógena; sin contaminación por endonucleasas o exonucleasas exógenas.
Descripción técnica
1. Utilice un arranque en caliente de 95℃ o 94℃ durante 1 a 5 minutos;
2. La tasa de amplificación de la ADN polimerasa rápida puede alcanzar hasta 1 kb/10 s.
3. El sistema tiene una gran adaptabilidad y es adecuado para reacciones de amplificación rápida.
4. La ADN polimerasa rápida tiene actividad polimerasa 5'-3' y actividad exonucleasa 5'-3'; no tiene actividad exonucleasa 3'-5' ni función de corrección de pruebas.
5. Adecuado para PCR convencional, microarrays genéticos y otros métodos de detección.
6. El extremo 3' del producto de PCR es A, y el producto se puede clonar directamente en el vector T.
7. Si la eficiencia de amplificación no es suficiente al configurar una extensión de 10 segundos/kb, se puede extender a 20 segundos/kb o a un tiempo de extensión mayor.
8. Cuando la muestra bruta no se amplifica bien, la plantilla se puede diluir adecuadamente y luego amplificar.