ADN polimerasa Taq de inicio en caliente HYA113
Este producto no solo inhibe eficazmente las reacciones inespecíficas causadas por el apareamiento inespecífico de cebadores o la formación de dímeros de cebadores durante la preparación y amplificación del sistema de PCR, lo que garantiza una excelente especificidad. Permite una amplificación más eficiente de plantillas de baja concentración y es adecuado para reacciones de amplificación de PCR múltiple. Además, presenta una compatibilidad excepcional con diversos sistemas de reacción, proporcionando un rendimiento de amplificación estable y constante en diferentes tipos de reacciones de PCR.
Componentes
1. 5 U/µL de ADN polimerasa Taq Hotstart
2. 10×PCRBuffer(Mg2+ (gratis) (opcional)
3. 25 mMgCl2(opcional)
*Tampón PCR 10× (Mg2+ libre) no contiene dNTP ni Mg2+Por favor, añada dNTPs y MgCl2al preparar el sistema de reacción.
Actividad Definición
Una unidad de actividad (U) se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 10 nmol de desoxinucleótidos en material insoluble en ácido, utilizando ADN de esperma de salmón activado como plantilla/cebador, en condiciones de 74 ℃ durante 30 minutos.
Almacenamiento
Almacenar a -20 ℃ para su conservación a largo plazo. Mezclar bien antes de usar y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Control de calidad
1. Pureza electroforética por SDS-PAGE ≥ 98%.
2. Sensibilidad de amplificación, variación entre lotes y estabilidad.
3. Libre de actividad nucleasa extraña, así como de contaminación por endonucleasas y exonucleasas extrañas.
Instrucciones
1. Sistema de reacción PCR
| Componentes | Volumen | Concentración en la mezcla maestra |
| 10 × Tampón PCR (Mg2+gratis)* | 5 µL | 1× |
| dNTPs (10 mM de cada dNTP) | 1 μL | 200 µM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/µL de ADN polimerasa Taq Hotstart | 0,25-0,5 μL | 1,25-2,5 U |
| Mezcla de imprimación 25×** | 2 μL | 1× |
| Plantilla | — — |
|
| ddH2EL | Hasta 50 µL | — — |
*El tampón PCR 10 × no contiene dNTPs ni Mg²⁺, y debe complementarse con dNTPs y MgCl₂ antes de su uso.
**Si se utiliza para qPCR/qRT-PCR, se debe añadir una sonda fluorescente al sistema de reacción. Generalmente, una concentración final de cebador de 0,2 μM proporciona resultados óptimos; si el rendimiento de la reacción no es satisfactorio, la concentración del cebador se puede ajustar en el rango de 0,2 a 1 μM. Por lo general, la concentración de la sonda se optimiza entre 0,1 y 0,3 μM. Se pueden realizar experimentos de gradiente de concentración para identificar la combinación óptima de cebadores y sondas.
2. Reacción Programa
| Método de dos pasos | |||
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Arranque en caliente | 95 ℃ | 1-5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10-20 s | 35-50 |
| Recocido-Extensión | 56~64℃ | 20-60 s | |
| Tresmétodo paso a paso | |||
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Arranque en caliente | 95 ℃ | 1-5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10-20 s | 35-50 |
| Recocido | 56~64℃ | 10-30 s | |
| Extensión | 72℃ | 10-60 s | |
Especificaciones técnicas
1. Permite un arranque en caliente rápido a 95℃ o 94℃ durante 1 a 5 minutos.
2. Presenta una excelente compatibilidad con los sistemas de reacción, junto con una mayor especificidad y sensibilidad.
3. Adecuado para reactivos de detección de PCR de alta sensibilidad y compatible con reacciones de amplificación de PCR multiplex.
4. Posee actividad polimerasa 5'-3' y actividad exonucleasa 5'-3'; carece de actividad exonucleasa 3'-5' y función de corrección de pruebas.
5. Aplicable para la detección cualitativa y cuantitativa en PCR convencional y RT-PCR.
6. Los productos de PCR presentan un extremo A saliente en el extremo 3', lo que permite su uso directo para la clonación con vectores T.
7. Para cebadores con bajas temperaturas de hibridación o para la amplificación de fragmentos largos que superen los 200 pb, se recomienda utilizar el protocolo de PCR de tres pasos.
8. ¡Solo para fines de investigación!