Kit maestro de aislamiento de ARNm NGS V2 HYD217
El kit maestro de aislamiento de ARNm NGS V2 es un kit de perlas magnéticas mejorado, diseñado específicamente para la purificación de ARNm. Las perlas de captura de ARNm son microesferas paramagnéticas de tamaño micrométrico conjugadas con Oligo(dT). Se combinan con el ARNm que contiene una cola de poli(A) para separar y purificar el ARNm, desde 10 ng hasta 4 μg de ARN total, manteniendo su integridad.
Componentes
| Componentes | 24 T | 96 T |
| Perlas de captura de ARNm 2.0 | 1,2 mL | 4,8 ml |
| Amortiguador de unión de perlas 2.0 | 1,2 mL | 4,8 ml |
| Amortiguador de lavado de perlas 2.0 | 15 ml | 60 ml |
| Tris Buffer 2.0 | 1,2 mL | 4,8 ml |
| agua libre de nucleasas | 1 mL | 4 ml |
Almacenamiento
Conservar a una temperatura de entre 2 y 8 ℃ durante 1 año.
Instrucciones
1. Preparación previa al experimento
Retire las perlas de captura de ARNm 2.0 de su lugar de almacenamiento a 2~-8℃ y déjelas reposar para que alcancen la temperatura ambiente (aproximadamente 30 minutos).
2. Preparación de la muestra
En un tubo de PCR libre de nucleasas, diluya de 10 ng a 4 μg de ARN total hasta un volumen de 50 μL con agua libre de nucleasas. Colóquelo en hielo para su uso inmediato.
3. Unión del ARNm a microesferas magnéticas
1. Invierta o agite las perlas magnéticas para mezclarlas uniformemente. Aspire 50 μL de perlas de captura de ARNm 2.0 y agréguelas a la muestra de ARN total de 50 μL. Pipetee hacia arriba y hacia abajo 6 veces para asegurar una mezcla completa.
2. Coloque la mezcla de perlas magnéticas y ARN en un instrumento de PCR y configure las siguientes condiciones: 65 °C durante 5 minutos; 25 °C durante 5 minutos; luego mantenga a 25 °C para completar la unión del ARN a las perlas magnéticas de captura.
3. Coloque la muestra en un soporte magnético y déjela reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos para separar el ARNm del ARN total. Retire con cuidado el sobrenadante.
4. Lavado de la muestra
1. Retire la muestra del soporte magnético, agregue 200 μL de Beads Wash Buffer 2.0 para resuspender las microesferas magnéticas y pipetee hacia arriba y hacia abajo 6 veces para mezclar bien.
2. Coloque la muestra en el soporte magnético y déjela reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Retire con cuidado el sobrenadante.
3. Repita el paso anterior un total de dos lavados.
5. Elución de primera ronda de la muestra de ARNm
1. Retire la muestra del soporte magnético, agregue 50 μL de tampón Tris 2.0 para resuspender las perlas magnéticas y pipetee hacia arriba y hacia abajo 6 veces para mezclar bien.
2. Coloque la muestra en un instrumento de PCR y configure las condiciones de la siguiente manera: 80 °C durante 2 minutos y luego mantenga a 25 °C para eluir el ARNm.
6. Re-unión del ARNm a las microesferas magnéticas
1. Retire la muestra del instrumento de PCR, agregue 50 μL de Beads Binding Buffer 2.0 y pipetee hacia arriba y hacia abajo 6 veces para mezclar bien.
2. Incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos para permitir que el ARNm se una a las microesferas magnéticas.
3. Coloque la muestra en el soporte magnético y déjela reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Retire con cuidado el sobrenadante.
7. Lavado de la muestra
Retire la muestra del soporte magnético, agregue 200 μL de Beads Wash Buffer 2.0 para resuspender las microesferas magnéticas, pipetee hacia arriba y hacia abajo 6 veces para mezclar bien, luego coloque la muestra de nuevo en el soporte magnético, déjela reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos y luego aspire todo el sobrenadante.
Nota: Finalmente, utilice una pipeta de 10 μL para aspirar completamente el líquido residual.
8. Seleccione el método de tratamiento de acuerdo con el proceso experimental subsiguiente.
a. Si el producto purificado se utiliza para la reacción de transcripción inversa, retire la muestra del soporte magnético, añada 10,5 μL de agua libre de nucleasas, pipetee hacia arriba y hacia abajo 6 veces para mezclar bien, caliéntela a 80 °C durante 2 minutos e inmediatamente colóquela en el soporte magnético durante 5 minutos. Una vez que la solución esté transparente, aspire cuidadosamente 8,5 μL del sobrenadante en un nuevo tubo de PCR libre de nucleasas.
b. Si el producto purificado se utiliza para la construcción de una biblioteca de ARN, añada el volumen correspondiente de tampón Frag/Prime según el manual de instrucciones y realice la construcción de la biblioteca.
Notas
1. Antes de utilizar las perlas magnéticas, es esencial dejar que se calienten a temperatura ambiente y mezclarlas. De lo contrario, podría afectar la eficiencia de recuperación de las muestras.
2. Durante el proceso de operación, es necesario asegurar estrictamente que haya ácido nucleico libre de RNasa y
3. Cuando este producto se utilice en combinación con otros reactivos, siga las instrucciones experimentales específicas.
4. Para obtener un buen efecto de purificación, es necesario tener ARN total con buena integridad y asegurar que el valor RIN (Número de Integridad del ARN) sea de 7,0 o superior.
5. Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables durante el manejo del equipo.
6. ¡Este producto es solo para fines de investigación!