Premezcla SYBR Green para RT-qPCR de un solo paso
N.º de catálogo: HCB5140A
El kit One Step RT-qPCR Syber Green Premix permite la cuantificación por fluorescencia mediante el colorante SYBR Green I. Utilizando cebadores específicos para cada gen, las reacciones de transcripción inversa y qPCR se completan en un solo tubo, eliminando la necesidad de abrir y pipetear repetidamente, lo que mejora considerablemente la eficiencia del ensayo y reduce el riesgo de contaminación. Para muestras de ARN, el kit emplea transcriptasa inversa termorresistente para una síntesis eficiente de ADNc y ADN polimerasa HotStart Taq para la amplificación cuantitativa. Con el sistema de tampón optimizado, la sensibilidad del kit puede alcanzar hasta 0,1 pg para dianas de alta expresión y hasta 1 pg para dianas de expresión moderada. El kit es adecuado para la amplificación y cuantificación de muestras de ADN. Permite la detección y cuantificación sensible de ácidos nucleicos de diferentes muestras vegetales y animales, células y microorganismos.
Componentes
| No | Nombre | Volumen | Volumen |
| 1 | Búfer avanzado | 250 μL | 2×1,25 mL |
| 2 | Mezcla avanzada de enzimas | 20 μL | 200 μL |
| 3 | H libre de RNasa2EL | 250 μL | 2×1,25 mL |
Condiciones de almacenamiento
Este producto debe almacenarse a una temperatura de entre -25 y -15 ℃, protegido de la luz, durante 1 año.
Instrucciones
1. Configuración del sistema de reacción d
| Componentes | Volumen (μL) | Volumen (μL) | Concentración final |
| Búfer avanzado | 12.5 | 25 | 1× |
| Mezcla avanzada de enzimas | 1 | 2 | - |
| Cebador directo (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Cebador inverso (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Plantilla de ARNb | incógnita | incógnita | - |
| H libre de RNasa2ELdo | a 25 | a 50 | - |
Notas:
1) a. TLa concentración final del cebador fue de 0,2 μmol/L, la cual también podía ajustarse entre 0,1 y 1 μmol/L según fuera necesario.
2) b. El reactivo es extremadamente sensible, con ARN total en el rango de 1 pg-1 μg, y las pruebas de muestras humanas mostraron una entrada óptima de 1 pg-100 ng, controlando un valor Ct general en el rango de 15-30 según corresponda.
3) c. Se recomienda utilizar 20 μL o 50 μL para garantizar la validez y reproducibilidad de la amplificación del gen objetivo.
4) d. Realice la preparación en una cabina de flujo laminar y utilice puntas y tubos de reacción libres de residuos de nucleasa; se recomiendan puntas con cartuchos de filtro. Evite la contaminación cruzada y la contaminación por aerosoles.
2.Programa de reacción
| Paso del ciclo | Temperatura. | Tiempo | Ciclos |
| Transcripción inversa | 50℃a | 6 minutos | 1 |
| desnaturalización inicial | 95℃ | 5 minutos | 1 |
| Reacción de amplificación | 95℃ | 15 segundos | 40 |
| 60℃b | 30 segundos | ||
| Etapa de curva de fusión | Valores predeterminados del instrumento | 1 | |
Notas:
1) a. La temperatura de transcripción inversa puede seleccionarse entre 50 y 55 °C según las necesidades experimentales. Para muestras de ADN, el proceso de transcripción inversa puede omitirse.
2) b. En casos especiales, la temperatura de recocido/extensión se puede ajustar según el valor de Tm de la imprimación; se recomienda 60 °C.
Notas
1. Este producto es solo para uso en investigación.
2. Por su seguridad, utilice batas de laboratorio y guantes desechables.
