PNGase F-HYI151
La PNGasa F es el método enzimático más eficaz para eliminar casi todos los oligosacáridos unidos a N de las glicoproteínas. La PNGasa F es una amidasa que escinde el enlace entre los residuos de GlcNAc y asparagina más internos de los oligosacáridos de alta manosa, híbridos y complejos de las glicoproteínas unidas a N.
Componentes
| Componentes | Tamaño |
| PNGasa F | 50 µl |
| Tampón desnaturalizante de glicoproteína 10× | 1000 µl |
| 10×GlicoBuffer 2 | 1000 µl |
| 10% NP-40 | 1000 µl |
Especificación
| Apariencia | líquido incoloro |
| Pureza de las proteínas | ≥95% (de SDS-PAGE) |
| Actividad | ≥500.000 U/mL |
| Exoglicosidasa | No se detectó ninguna actividad. |
| Endoglicosidasa F1 | No se detectó ninguna actividad. |
| Endoglicosidasa F2 | No se detectó ninguna actividad. |
| Endoglicosidasa F3 | No se detectó ninguna actividad. |
| Endoglicosidasa H | No se detectó ninguna actividad. |
| Proteasa | No se detectó ninguna actividad. |
Propiedades
| Número CE | 3.5.1.52 (Recombinante a partir de microorganismos) |
| Peso molecular | 35 kDa (SDS-PAGE) |
| Punto isoeléctrico | 8.14 |
| pH óptimo | 7.0-8.0 |
| Temperatura óptima | 65 °C |
| Especificidad del sustrato | Escisión de los enlaces glucosídicos entre los residuos de GlcNAc y asparagina. |
| Sitios de reconocimiento | Glicanos unidos a N, a menos que contengan fucosa α1-3. |
| Activadores | TDT |
| inhibidor | Hoja de datos de seguridad |
| Temperatura de almacenamiento | -25～-15 ℃ |
| Inactivación por calor | Una mezcla de reacción de 20 µL que contiene 1 µL de PNGasa F se inactiva mediante incubación a 75 °C durante 10 minutos. |
Aplicaciones
Esta enzima es útil para eliminar los residuos de carbohidratos de las proteínas.
Figura 1. Especificidad del sustrato de la PNGasa F.
Figura 2. Sitios de reconocimiento de la PNGasa F. Cuando los residuos internos de GlcNAc están unidos a la fucosa α1-3, la PNGasa F no puede escindir los oligosacáridos unidos a N de las glicoproteínas. Esta modificación es común en plantas y algunas glicoproteínas de insectos.
Definición de unidad
Una unidad (U) se define como la cantidad de enzima necesaria para eliminar >95% del carbohidrato.
a partir de 10 µg de RNasa B desnaturalizada en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 10 µL.
Condiciones de reacción
- Disuelva de 1 a 20 µg de glicoproteína con agua desionizada, agregue 1 µl de tampón desnaturalizante de glicoproteína 10× y H2O (si es necesario) para obtener un volumen total de reacción de 10 µl.
- Incubar a 100 °C durante 10 minutos y enfriar en hielo.
- Agregue 2 µl de GlycoBuffer 2 10×, 2 µl de NP-40 al 10 % y mezcle.
- Agregue 1-2 µl de PNGase F y H2O (si es necesario) hasta alcanzar un volumen total de reacción de 20 µl y mezcle.
- Incubar la reacción a 37 °C durante 60 minutos.
- Para análisis SDS-PAGE o análisis HPLC.