DNasa I recombinante (libre de RNasa) HYC117
La DNasa I es una endonucleasa que puede digerir ADN monocatenario y bicatenario para producir desoxinucleótidos simples u oligodesoxinucleótidos monocatenarios o bicatenarios. Puede hidrolizar el enlace fosfodiéster para producir monodesoxinucleótidos y oligodesoxinucleótidos que contienen grupos 5'-fosfato y grupos 3'-OH. El producto de digestión promedio es el politetranucleótido más pequeño. La DNasa I puede catalizar muchas formas de ADN, como ADN monocatenario, ADN bicatenario e incluso cromatina (su velocidad de corte se ve afectada por las histonas). El rango de pH óptimo es 7-8. La actividad de la DNasa I depende del Ca²⁺.+ y puede activarse mediante iones metálicos divalentes, como el Co2+, Mn²+, Zn²+, etc. 5 mM Ca²+ puede proteger la enzima de ser hidrolizada. En presencia de Mg²+, la enzima puede reconocer y cortar cualquier sitio en cualquier hebra de ADN de forma aleatoria; y en presencia de Mn²+Puede reconocer dos hebras de ADN al mismo tiempo y cortarlas casi en el mismo sitio para formar extremos romos o extremos cohesivos con 1 o 2 nucleótidos sobresaliendo.
Componentes
| Componentes | 1KU | 5KU | 50KU |
| DNasa I recombinante (libre de RNasa) | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| Tampón de DNasa I 10 × | 1 ml | 5×1 ml | 5×10 ml |
Almacenamiento
Almacenar a -15 °C ~ -25 °C durante un año.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que degradará completamente 1 µg de ADN pBR322 en 10 minutos a 37 °C.
Especificación
| Fuente | La DNasa I del páncreas bovino se expresó en un sistema de expresión de levadura y se purificó. |
| búfer de almacenamiento | 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerol, pH 7,6 a 25℃. |
| Actividad de la ARNasa | La aplicación de 5 U de DNasa I con 1,6 μg de ARN MS2 durante 4 horas a 37 ℃ no produce degradación, según lo determinado por electroforesis en gel de agarosa. |
Instrucciones
1. Prepare la solución de reacción en el tubo libre de RNasa según las proporciones que se indican a continuación.
| Componentes | Volumen |
| ARN | X μg |
| Tampón DNasa I 10× | 1 µL |
| DNasa I recombinante (libre de RNasa) | 1 U por μg de ARN* |
| ddH₂O libre de RNasa | Hasta 10 μL |
*Calcule el volumen de DNasa I que debe agregarse según la cantidad de ARN. Use 1 U de DNasa I por µg de ARN. Sin embargo, si el ARN es menor a 1 µg, use 1 U de DNasa I.
2. 37 ℃ durante 15 minutos;
3. Añada EDTA 0,5 M hasta alcanzar una concentración final de 2,5 mM a 5 mM y caliente a 65 °C durante 10 minutos para detener la reacción. La muestra puede utilizarse directamente en la siguiente reacción, como por ejemplo un experimento de transcripción inversa.