Kit de detección de endotoxinas del factor C recombinante HYI131
El kit de detección de endotoxinas del factor C recombinante puede reemplazar el lisado de amebocitos de Limulus (LAL) tradicional para la detección de endotoxinas en medicamentos inyectables para humanos y animales (como productos químicos, radiofármacos, antibióticos, productos biológicos, etc.) y dispositivos médicos (como dializados, dispositivos implantables, etc.), materias primas y auxiliares, productos intermedios y productos liberados. Este kit es una alternativa altamente sensible, específica, estable y sostenible al lisado de amebocitos de Limulus, que no depende de componentes de origen animal. Puede medir concentraciones de endotoxinas en el rango de 0,005 a 5 EU/mL.
Principio de detección
El factor C de Limulus es una serina proteogénica sensible a la endotoxina bacteriana en las células sanguíneas de Limulus. El factor C de Limulus es el primero en activarse por la endotoxina en el sistema de aglutinación sanguínea de Limulus mediado por endotoxina bacteriana, iniciando así la cascada de hemaglutinación en las células sanguíneas de Limulus. El factor C recombinante (rFC) es un factor C recombinante (rFC) expresado mediante recombinación genética. El factor C recombinante, al unirse y activarse por la endotoxina, puede escindir el sustrato para obtener fluoróforos libres. La liberación de fluoróforos es proporcional a la concentración de endotoxina, lo que permite su detección cuantitativa. En comparación con el método clásico de detección de endotoxinas en lisado de amebocitos de Limulus, el método de detección de endotoxinas con factor C recombinante presenta mayor especificidad, precisión, exactitud, rango lineal y límite de cuantificación, lo que lo convierte en un método mejorado para la detección de endotoxinas en lisado de amebocitos de Limulus.
Componentes
| Reactivo | 48T | 96T |
| solución de sustrato fluorescente | 3 ml | 6 ml |
| Amortiguador de medición | 2,5 ml | 5 ml |
| solución enzimática rFC | 0,6 mL | 1,2 mL |
| agua reactiva LAL | 30 ml | 30 ml |
| endotoxina estándar de control | 1 vial | 2 viales |
| Placa de reacción desmontable no pirógena de 96 pocillos | 1 pieza | 1 pieza |
Nota: La endotoxina de control estándar es un polvo liofilizado. Consulte la etiqueta para conocer el título y el volumen de reconstitución.
Métodos de transporte y almacenamiento
Transporte a 2-8 °C. Al recibir el kit, guárdelo inmediatamente a 2-8 °C. Los kits sin abrir tienen una validez de 12 meses. La endotoxina de referencia se conserva a 2-8 °C tras su disolución y su validez es de hasta 8 semanas.
Resumen de la operación
El ensayo se realizó en una placa de 96 pocillos y los valores de fluorescencia se midieron a una longitud de onda de excitación/emisión de 380/440 nm a la hora cero después de la adición de la muestra y una hora después de la incubación a 37 °C ± 1 °C. La diferencia neta de fluorescencia se obtiene calibrando la diferencia de lectura de fluorescencia (ΔRFU) entre la endotoxina estándar de control y la muestra utilizando la diferencia de fluorescencia (ΔRFU) del control negativo. El logaritmo de la diferencia neta de fluorescencia es proporcional al logaritmo de la concentración de endotoxina y es lineal en el rango de 0,005 a 5,0 EU/mL. La concentración de endotoxina en la muestra se puede calcular de acuerdo con la curva estándar.
Materiales consumibles y equipos necesarios
Tubo de dilución de vidrio desechable libre de pirógenos (para la dilución de endotoxinas estándar de control); pipetas y cabezales de succión estériles libres de pirógenos; oscilador de vórtice; temporizador; lector de fluorescencia capaz de detectar fluorescencia (longitud de onda ajustada a 380 nm/440 nm).