Digestión con tripsina recombinante (1×)-HYI214
La tripsina es una serina proteasa para la disociación de líneas celulares dependientes de la adhesión mediante la escisión Enlaces peptídicos C-terminales de lisina y arginina, hidrolizando la proteína intercelular, interrumpiendo Conexiones célula a célula y diferenciación de tejidos. La solución digestiva de tripsina recombinante Hyasen, una enzima de alta pureza obtenida por fermentación microbiana, es una alternativa enzimática recombinante libre de componentes animales a la tripsina porcina o bovina para la digestión celular en los campos de la inmunoterapia celular, vacunas, cribado de fármacos, anticuerpos y otros. Este producto contiene EDTA y no contiene rojo de fenol.
Componentes
| Componentes | Talla-1 | Talla 2 | Talla 3 |
| Digestión con tripsina recombinante (1×) | 100 ml | 500 ml | 1 L |
Almacenamiento
Conservar a una temperatura de entre 2 y 8 °C; proteger de la luz; evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Propiedad del producto
- Leve: La disociación es más específica y menos tóxica debido a la acción de una sola enzima y a su alta pureza. Este mecanismo también puede reducir la disociación y destrucción de diversas proteasas en la tripsina animal y otros reactivos de extracción.
- Libre de ingredientes de origen animal: En el proceso de producción no se utilizan materias primas de origen animal, por lo que no existe riesgo de posibles imprevistos como la contaminación por virus exógenos, y cumple con la normativa de administración de medicamentos.
- Estable: Puede almacenarse protegido de la luz durante 12 meses a una temperatura de entre 2 y 8 °C o de entre -20 y -5 °C.
- Conveniente: Este producto es una preparación estéril. Puede sustituir a la tripsina en los experimentos y su dilución puede reducir su actividad.
Instrucciones
La solución de digestión con tripsina recombinante EDTA (1x) puede ser un reemplazo directo de la tripsina en
protocolos existentes.
- Precaliente la solución digestiva de tripsina y el medio de cultivo completo a 37 °C antes de su uso.
- Aspire el medio de cultivo usado y deséchelo.
- Lave la monocapa celular con 5 ml de solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) sin calcio ni magnesio. Aspire y deseche.
- Agregue un volumen adecuado de solución digestiva de tripsina al matraz. Asegúrese de que la solución digestiva de tripsina cubra completamente la monocapa celular.
- Incubar a 37 °C hasta que las células se hayan desprendido. Observar la monocapa celular con un microscopio invertido para asegurar el desprendimiento completo de las células de la superficie del matraz. Golpear suavemente el matraz para desprender las células si es necesario.
- Agregue de 5 a 10 ml de medio completo precalentado al matraz. Incline el matraz en todas direcciones para enjuagarlo completamente. Transfiera la suspensión celular a un tubo cónico de 15 ml.
- Centrifugar a 100 × g durante 5-10 minutos.
- Deseche el sobrenadante y resuspenda el sedimento celular con 2-5 ml de medio completo precalentado.
- Determine la densidad de células viables y el porcentaje de viabilidad utilizando un contador de células.
- Siembra, incuba y subcultiva según los protocolos habituales, dependiendo del tipo de célula.
- El tiempo de digestión, la viabilidad celular y el rendimiento de las diferentes células se pueden consultar en la tabla siguiente.
| Línea celular | Medio | Tiempo (min) | Viabilidad (%) |
| REAL | EMEM+5%FBS | 8 | 99.9 |
| MDCK | DMEM + 5 % FBS | 15 | 100 |
| DMEM + 5 % FBS | 2 | 97.3 | |
| CHO-K1 | medio de cultivo de células CHO | 7 | 96.8 |
Notas
- Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes durante la operación.
- Este producto no puede utilizarse sobre el cuerpo humano.
- Por favor, trabaje en un entorno estéril.