Digestión con tripsina recombinante (10×)-HYI213
La tripsina es una serina proteasa para la disociación de líneas celulares dependientes de la adhesión mediante la escisión Enlaces peptídicos C-terminales de lisina y arginina, hidrolizando la proteína intercelular, interrumpiendo Conexiones célula a célula y diferenciación de tejidos. La solución digestiva de tripsina recombinante Hyasen, una enzima de alta pureza obtenida por fermentación microbiana, es una alternativa enzimática recombinante libre de componentes animales a la tripsina porcina o bovina para la digestión celular en los campos de la inmunoterapia celular, vacunas, cribado de fármacos, anticuerpos y otros. Este producto contiene EDTA y no contiene rojo de fenol.
Componentes
| Componentes | Talla-1 | Talla 2 | Talla 3 |
| Digestión con tripsina recombinante (10×) | 10 ml | 100 ml | 500 ml |
Almacenamiento
Conservar a una temperatura de entre 2 y 8 °C; proteger de la luz; evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Propiedad del producto
- Leve: La disociación es más específica y menos tóxica debido a la acción de una sola enzima y a su alta pureza. Este mecanismo también puede reducir la disociación y destrucción de diversas proteasas en la tripsina animal y otros reactivos de extracción.
- Libre de ingredientes de origen animal: En el proceso de producción no se utilizan materias primas de origen animal, por lo que no existe riesgo de posibles imprevistos como la contaminación por virus exógenos, y cumple con la normativa de administración de medicamentos.
- Estable: Puede almacenarse protegido de la luz durante 12 meses a una temperatura de entre 2 y 8 °C o de entre -20 y -5 °C.
- Conveniente: Este producto es una preparación estéril. Puede sustituir a la tripsina en los experimentos y su dilución puede reducir su actividad.
Instrucciones
La solución de digestión con tripsina recombinante y EDTA (10x) está diseñada para la disociación de líneas celulares dependientes de la adhesión con fuertes propiedades adhesivas.
1. Precalentar la solución digestiva de tripsina y el medio de cultivo completo a 37 °C antes de su uso.
Nota: La solución digestiva de tripsina recombinante puede utilizarse a temperatura ambiente para muchos tipos de células.
2. Aspire el medio de cultivo usado y deséchelo.
3. Lave la monocapa celular con 5 ml de solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS) sin calcio ni magnesio. Aspire y deseche.
4. Añada un volumen adecuado de solución digestiva de tripsina al matraz. Asegúrese de que la solución digestiva de tripsina cubra completamente la monocapa celular.
5. Incubar a 37 °C hasta que las células se hayan desprendido. Observar la monocapa celular con un microscopio invertido para asegurar el desprendimiento completo de las células de la superficie del matraz. Golpear suavemente el matraz para desprender las células si es necesario.
6. Añada de 5 a 10 ml de medio completo precalentado al matraz. Incline el matraz en todas las direcciones para enjuagarlo completamente. Transfiera la suspensión celular a un tubo cónico de 15 ml.
7. Centrifugar a 100 × g durante 5-10 minutos.
8. Deseche el sobrenadante y resuspenda el sedimento celular con 2-5 ml de medio completo precalentado.
9. Determinar la densidad de células viables y el porcentaje de viabilidad utilizando un contador de células.
10. Siembre, incube y subcultive según los protocolos habituales, dependiendo del tipo de célula.
Solución de digestión con tripsina recombinante diluida 10x con EDTA (opcional)
La solución de digestión con tripsina recombinante y EDTA (10x) está diseñada para la disociación de líneas celulares dependientes de la adhesión con fuertes propiedades adhesivas. Esta solución también puede diluirse selectivamente a la concentración deseada para la disociación de líneas celulares generales de material plástico. Diluya la solución madre 10x de la siguiente manera:
- Prepare una solución madre de EDTA 100 mM pH 8.0 (100x). Filtre (tamaño de poro de 0,2 µm) para esterilizar.
- Prepare asépticamente una solución tampón DPBS/1 mM EDTA añadiendo 1 ml de solución EDTA 100x (del paso 1) a 99 ml de DPBS sin calcio ni magnesio.
- Diluya asépticamente la solución de digestión con tripsina recombinante 10x hasta la concentración deseada en tampón DPBS/1 mM EDTA.
Notas
- Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes durante la operación.
- Este producto no puede utilizarse sobre el cuerpo humano.
- Por favor, trabaje en un entorno estéril.