Ribonucleasa A (RNasa A), del páncreas bovino HYC115
La ribonucleasa A (RNasa A) es un polipéptido de cadena simple con cuatro enlaces disulfuro y un peso molecular aproximado de 13,7 kDa. Como endorribonucleasa, degrada específicamente los residuos de citosina (C) o uracilo (U) en el ARN monocatenario. Específicamente, la escisión reconoce el enlace fosfodiéster formado por la 5'-ribosa de un nucleótido determinado y el grupo fosfato de la 3'-ribosa del nucleótido pirimidínico adyacente, hidrolizando así el fosfato cíclico 2',3' al fosfato de nucleósido 3' correspondiente (por ejemplo, la RNasa A escinde pG-pG-pC-pA-pG para producir pG-pG-pCp y A-PG). La RNasa A tiene la mayor actividad en la escisión de ARN monocatenario. La concentración de trabajo recomendada es de 1 a 100 μg/mL y es compatible con diversos sistemas de reacción. Se pueden utilizar bajas concentraciones de sal (0-100 mM de NaCl) para cortar ARN monocatenario, ARN bicatenario y cadenas de ARN formadas por hibridación ARN-ADN. Sin embargo, a altas concentraciones de sal (≥0,3 M), la RNasa A solo corta específicamente el ARN monocatenario. La aplicación más común de la RNasa A es la eliminación de ARN durante la preparación de ADN plasmídico o ADN genómico. La presencia o ausencia de actividad de la enzima DNasa en este proceso de preparación es una de las contaminaciones a las que se debe prestar atención. El método tradicional de ebullición en baño de agua puede utilizarse para inactivar la actividad de la DNasa. Además, este producto también puede utilizarse en experimentos de biología molecular, como el análisis de protección de la enzima ARN y el análisis de secuencias de ARN.
Componentes
| Componentes | Talla-1 | Talla 2 | Talla 3 |
| Ribonucleasa A (RNasa A), del páncreas bovino | 0,1 g | 1g | 10 g |
Almacenamiento
Almacenar en un lugar seco a -25~-15℃, válido por 2 años.
Propiedades
| Fuente | páncreas bovino |
| Sinónimos | Ribonucleasa I; ARNasa A; Endorribonucleasa I; Ribonucleasa pancreática; Ribonucleasa 3'-pirimidnooligonucleotidohidrolasa; |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Apariencia | Polvo liofilizado blanco |
| Peso molecular | ~13,7 kDa |
| Valor de pH adecuado | 7.6 (Rango de actividad 6-10) |
| Temperatura adecuada | 60℃ (Rango de actividad 15-70℃) |
| Activador | Sal sódica, silvina |
| inhibidor | Inhibidor de la RNasa |
| Método de inactivación | El calentamiento no lo inactivará, se recomienda utilizar columnas centrífugas o extracción con fenol-cloroformo para eliminarlo por completo. |
| Solubilidad | Soluble en agua (10 mg/ml) |
| Pérdida por secado | ≤5,0% |
| Actividad enzimática | ≥60 KU/mg |
| Punto isoeléctrico | 9.6 |
Preparación de la solución madre
Este es uno de los métodos comunes para preparar la solución madre de RNasa A. También se puede preparar mediante otros métodos, según los métodos tradicionales de laboratorio o las referencias.
1. Solución madre (por ejemplo, disuelta directamente en Tris-HCl 10 mM, pH 7,5; o solución de Tris-NaCl)
1) Prepare una solución madre de RNasa A de 10 mg/mL con acetato de sodio 10 mM (pH 5,2);
2) Calentar a 100℃ durante 15 minutos;
3) Enfriar a temperatura ambiente, agregar 1/10 del volumen de Tris-HCl 1 M (pH 7,4) y ajustar el pH a 7,4 (por ejemplo, agregar 500 μL de Tris-HCl 1 M, pH 7,4 a 5 mL de solución madre de RNasa de 10 mg/mL);
4) Dividir en alícuotas y congelar a -25~-15℃, donde se pueden almacenar de forma estable hasta por 2 años.
Nota: Al hervir la solución de RNasa A en condiciones neutras, se formarán precipitados de RNasa; si se hierve a un pH más bajo y se observan precipitados, esto podría deberse a la presencia de impurezas proteicas. Si se encuentran precipitados después de la ebullición, las impurezas pueden eliminarse mediante centrifugación a alta velocidad (13 000 rpm), seguida de alícuotas y congelación.
Notas
1. Este producto ha sido sometido al método correspondiente para eliminar la contaminación por DNasa durante el proceso de producción. Para la extracción convencional de ADN plasmídico o genómico (sin un nivel cuantitativo estricto de ADN), no se requiere ebullición a alta temperatura y la solución madre puede prepararse directamente. Para experimentos que requieren un control estricto de los residuos de la enzima DNasa, se recomienda hervir a alta temperatura o adquirir una solución de RNasa A libre de DNasa y proteasa.
2. La RNasa A se adsorbe fuertemente en el material de vidrio, por lo que se recomienda colocar la solución en un tubo de centrífuga de plástico.
3. Para los investigadores que realizan experimentos completos de ARN al mismo tiempo, asegúrense de evitar que la RNasa A introduzca interferencias que afecten la precisión de los resultados de las pruebas.
4. Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.
5. ¡Este producto es solo para fines de investigación científica!