Inhibidor de la ARNasa (sin glicerol) HYA312
El inhibidor de RNasa es un inhibidor de RNasa recombinante de ratón expresado y purificado a partir de Escherichia coli. Se une a la RNasa A, B o C en una proporción 1:1 mediante enlaces no covalentes, inhibiendo así la actividad de las tres enzimas y protegiendo el ARN de la degradación. Sin embargo, es ineficaz contra la ribonucleasa 1, la ribonucleasa T1, la nucleasa S1, la ribonucleasa H y las ribonucleasas derivadas de Aspergillus. Los inhibidores de RNasa se han probado mediante RT-PCR, RT-qPCR e IVT-ARNm, y son compatibles con varias transcriptasas inversas comerciales, varias ADN polimerasas y ARN polimerasas. En comparación con los inhibidores de RNasa humanos, los inhibidores de RNasa de ratón no contienen dos cisteínas que son muy sensibles a la oxidación, por lo que tienen mayores propiedades antioxidantes, lo que los hace estables a bajas concentraciones de DTT (menos de 1 mM). Esta característica lo hace adecuado para reacciones en las que no se pueden añadir altas concentraciones de DTT (por ejemplo, RT-PCR en tiempo real).
Componentes
| Componente | 2 A | 20 KU | 200 KU |
| Inhibidor de RNasa 80 U/µL (sin glicerol) | 25 µL | 250 μL | 2,5 ml |
Almacenamiento
Almacenar entre -25°C y -15°C. Válido por 1 año.
Definición de unidad
Una unidad de actividad (U) se define como la cantidad de enzima necesaria para inhibir el 50% de la actividad de 5 ng de RNasa A.
Control de calidad
1. Actividad exonucleasa: 40 U de este producto y 1 μg de ADN digerido con λ-Hind III reaccionaron a 37℃ durante 16 horas, y la banda electroforética del ADN no cambió;
2. Actividad endonucleasa: 40 U de este producto y 1 μg de λDNA reaccionaron a 37℃ durante 16 horas, y la banda electroforética del ADN no cambió;
3. NickPlaza bursátil norteamericanaactividad: 40 U de este producto y 1 μg de pBR322 reaccionaron a 37℃ durante 16 horas, y la banda electroforética del ADN no cambió;
4. Actividad de la ARNasa: 40 U de este producto y 1,6 μg de ARN MS2 reaccionaron a 37℃ durante 4 horas, y la banda electroforética no cambió;
5. E. coli detección de residuos de ADN: El ácido nucleico restante en 40 U de este producto se detectó mediante qPCR TaqMan específica para E. coliADNr 16S. Detección, E. coliresiduo del genoma ≤ 0,1 pg/40 U.
Aplicaciones
Este producto puede utilizarse ampliamente en cualquier experimento donde pueda existir interferencia de la ARNasa para evitar la degradación del ARN, como por ejemplo:
1. Síntesis de la primera cadena de ADNc, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2. Proteger el ARN de la degradación durante la transcripción/traducción in vitro (como en un sistema de replicación viral in vitro);
3. Inhibir la actividad de la ARNasa durante la separación y purificación del ARN.
Notas
1. Agitar o remover violentamente provocará la inactivación de la enzima;
2. La temperatura activa del inhibidor es de 25-55ºC, y se inactivará a una temperatura de ≥65ºC;
3. No inhibe la actividad de la RNasa H, la RNasa 1 y la RNasa T1;
4. El rango de pH para la inhibición de la actividad de la RNasa es relativamente amplio (es activa a pH 5-9) y muestra una actividad máxima a pH 7-8.