Inhibidor de la ARNasa HYJ220
Los inhibidores de RNasa son inhibidores de RNasa de ratón recombinantes expresados y purificados en Escherichia coli. Se unen a la RNasa A, B o C en una proporción 1:1 mediante enlaces no covalentes, inhibiendo la actividad de estas tres enzimas y protegiendo el ARN de la degradación. Sin embargo, son ineficaces contra la RNasa 1, la RNasa T1, la nucleasa S1, la RNasa H y las ribonucleasas de Aspergillus. Los inhibidores de RNasa se han probado en ensayos de RT-PCR, RT-qPCR y IVT-ARNm, y son compatibles con varias transcriptasas inversas comerciales y varias ADN y ARN polimerasas. En comparación con los inhibidores de RNasa humanos, los inhibidores de RNasa de ratón carecen de dos cisteínas, que son altamente sensibles a la oxidación, lo que resulta en una mayor resistencia a la oxidación y estabilidad a bajas concentraciones de DTT (menos de 1 mM). Esta característica los hace adecuados para reacciones donde no se pueden agregar altas concentraciones de DTT, como la RT-PCR en tiempo real.
Componentes
| Componentes | 10KU | 40KU | 400KU | 4000KU |
| Inhibidor de la ARNasa (40 U/μL) | 0,25 mL | 1 mL | 10 ml | 100 ml |
Almacenamiento
Conservar entre -25 y -15 °C. Válido durante 2 años (evitar la congelación y descongelación repetidas).
Búfer de almacenamiento
50 mM de KCl, 20 mM de HEPES-KOH (pH 7,6 a 25 °C), 8 mM de DTT y 50 % de glicerol.
Definición de actividad
Una unidad de actividad (U) se define como la cantidad de enzima necesaria para inhibir el 50% de la actividad de 5 ng de RNasa A.
Control de calidad
1. Actividad exonucleasa:Cuando se hicieron reaccionar 40 U de este producto con 1 μg de ADN digerido con λ-Hind III a 37 °C durante 16 horas, la banda electroforética del ADN permaneció inalterada.
2. Actividad endonucleasa: Cuando se hicieron reaccionar 40 U de este producto con 1 μg de ADN λ a 37 °C durante 16 horas, la banda electroforética del ADN permaneció inalterada.
3. Actividad de la nicarasa: Cuando se hicieron reaccionar 40 U de este producto con 1 μg de pBR322 a 37 °C durante 16 horas, la banda electroforética del ADN permaneció inalterada.
4. Actividad de la ARNasa: Cuando se hicieron reaccionar 40 U de este producto con 1,6 μg de ARN MS2 a 37 °C durante 4 horas, la banda electroforética permaneció inalterada.
5.ADN residual de E. coli: Se detectó ácido nucleico residual en 40 U de este producto mediante qPCR TaqMan específica para el ADNr 16S de E. coli, y el residuo genómico de E. coli fue ≤ 0,1 pg/40 U.
6. Endotoxina: Prueba LAL, Farmacopea China Edición 2020, Parte IV, Prueba de límite de gel, Reglas generales (1143), contenido de endotoxina bacteriana ≤ 10 EU/mg.
Aplicaciones
Este producto puede utilizarse ampliamente en cualquier experimento donde pueda producirse interferencia de la ARNasa para prevenir la degradación del ARN, como por ejemplo:
1. Síntesis de ADNc de primera cadena, RT-PCR, RT-qPCR, etc.;
2. Proteger el ARN de la degradación durante la transcripción/traducción in vitro (como en los sistemas de replicación viral in vitro);
3. Inhibición de la actividad de la ARNasa durante el aislamiento y la purificación del ARN.