Mezcla maestra colorimétrica RT-LAMP HYB411
Este producto contiene tampón de reacción, mezcla de enzimas RT (ADN polimerasa Bst y transcriptasa inversa termorresistente), protectores liofilizados y componentes de colorante cromogénico. Para usarlo, simplemente agregue el tampón, la enzima de reacción y el cebador, y agréguelos a la plantilla. El protector liofilizado se puede agregar directamente. Se conecta a un liofilizador y se liofiliza, agregando únicamente los cebadores y las plantillas al momento de su uso. Este kit proporciona una detección visual rápida y clara de la amplificación: la reacción negativa se indica en rojo y la reacción positiva en amarillo.
Componentes
| Componentes | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Tampón de amplificación mediada por bucles (con colorante) | 0,96 ml | 4,8 mL × 2 | 9,6 mL × 10 |
| Mezcla de enzimas RT | 270 μL | 2,7 ml | 2,7 mL × 10 |
| protector liofilizado | 0,96 mL×2 | 9,6 mL × 2 | 9,6 mL × 20 |
Almacenamiento
Conservar a una temperatura de -25 a -15 ℃. Válido durante 12 meses.
Instrucciones
1. Descongele el tampón de reacción a temperatura ambiente. Agite brevemente en un vórtex o invierta los tubos varias veces para mezclar bien, luego centrifugue para recoger el líquido en el fondo del tubo.
2. Preparación del sistema de reacción: este reactivo se puede preparar en dos sistemas de reacción, mezcla de reacción líquida y mezcla de sistema de liofilización.
1) Preparar la mezcla de reacción líquida
| Componentes | Volumen |
| Tampón de amplificación mediada por bucles (con colorante) | 10 μL |
| Mezcla de enzimas RT | 2,8 m L |
| Mezcla de imprimación 10×* | 5 ml L |
| ADN/ARN molde** | x μ L |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μ L |
2) Mezcla del sistema de liofilización
① Preparar la mezcla para liofilización
| Componentes | Volumen |
| Tampón de amplificación mediada por bucles (con colorante) | 10 μL |
| protector liofilizado | 20 μL |
| Mezcla de enzimas RT | 2,8 μL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μ L |
② Liofilizado
La mezcla preparada se liofilizó en un sistema de 50 μL.
③ Preparar la mezcla de reacción
| Componentes | Volumen |
| Mezcla liofilizada | 1 pieza |
| Mezcla de imprimación 10×* | 5 ml L |
| ADN/ARN molde** | x μ L |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μ L |
*10 × Concentración de la mezcla de cebadores: 16 μMFIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
**Se recomienda el uso de DEPC (soluble en agua) como plantilla para ácidos nucleicos.
3. Incubar a 65 °C durante 30-45 minutos, tiempo que puede prolongarse adecuadamente según el cambio de color. Tiempo de reacción.
4. A simple vista, el amarillo era positivo y el rojo era negativo.
Noes
1. Puede aparecer sal en el fondo del tubo de almacenamiento; agite brevemente en un vórtex o invierta los tubos varias veces para mezclarlos completamente a temperatura ambiente.
2. La temperatura de reacción se puede optimizar entre 62 ℃ y 68 ℃ según las condiciones de los cebadores.
3. Los reactivos envasados no deben exponerse al aire durante mucho tiempo.
4. La reacción de decoloración roja y amarilla depende del cambio de pH del sistema de reacción, por favor no utilice la solución de almacenamiento de ácido nucleico que contiene Tris, se recomienda utilizar ddH2Ácido nucleico almacenado;
5. El experimento debe estar estandarizado, incluyendo la preparación del sistema de reacción, la liofilización, el procesamiento de la muestra y el proceso de adición de la muestra;
6. Para evitar la contaminación, se recomienda preparar el sistema de reacción en una mesa de trabajo ultra limpia, en otras palabras, agregue plantillas a la campana extractora de la sala para evitar interferencias de falsos positivos.