Mezcla maestra fluorescente RT-LAMP HYB413
Este producto contiene tampón de reacción, mezcla de enzimas RT de ADN polimerasa Bst y transcriptasa inversa termorresistente, protector liofilizado y componentes de colorante fluorescente. El tampón de reacción contiene Mg2+Para la amplificación, los usuarios pueden mezclar directamente el tampón de reacción, la mezcla de enzimas RT, el colorante fluorescente y el cebador, y luego agregar la plantilla. Si es necesario, pueden agregar el protector liofilizado para preparar un sistema liofilizable.
Componentes
| Componentes | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Amortiguador de amplificación mediado por bucles | 1,2 mL | 4 mL × 3 | 12 mL×10 |
| Mezcla de enzimas RT | 245 μL | 2,45 ml | 2,45 mL × 10 |
| protector liofilizado | 0,96 mL×2 | 9,6 mL × 2 | 9,6 mL × 20 |
| Tinte 25× | 192 μL | 0,96 mL×2 | 0,96 mL×20 |
Almacenamiento
Conservar a una temperatura de -25 a -15 ℃. Válido durante 12 meses.
Instrucciones
1. Descongele el tampón de reacción a temperatura ambiente. Agite brevemente en un vórtex o invierta los tubos varias veces para mezclar bien, luego centrifugue para recoger el líquido en el fondo del tubo.
2. Preparación del sistema de reacción: este reactivo se puede preparar en dos sistemas de reacción, mezcla de reacción líquida y mezcla de sistema de liofilización.
1) Preparar la mezcla de reacción líquida
| Componentes | Volumen |
| Amortiguador de amplificación mediado por bucles | 12,5 μL |
| Tinte 25× | 2 μL |
| Mezcla de enzimas RT | 2,55 μL |
| Mezcla de imprimación 10×* | 5 μL |
| ADN/ARN molde** | x μL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μ L |
2) Mezcla del sistema de liofilización
① Preparar la mezcla para liofilización
| Componentes | Volumen |
| Amortiguador de amplificación mediado por bucles | 12,5 μL |
| protector liofilizado | 20 μL |
| Tinte 25× | 2 μL |
| Mezcla de enzimas RT | 2,55 μL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μ L |
② Liofilizado
La mezcla preparada se liofilizó en un sistema de 50 μL.
③ Preparar la mezcla de reacción
| Componentes | Volumen |
| Mezcla liofilizada | 1 pieza |
| Mezcla de imprimación 10×* | 5 ml L |
| ADN/ARN molde** | x μ L |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μ L |
*10 × Concentración de la mezcla de cebadores: 16 μMFIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
**Se recomienda el uso de DEPC (soluble en agua) como plantilla para ácidos nucleicos.
3. Programa de reacción
Configure los parámetros en el instrumento de PCR (como el ABI7500) de la siguiente manera:
| Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| 65℃ | años 60 *Recoger señal fluorescente | 30 |
Notas
1. Puede aparecer sal en el fondo del tubo de amortiguación; agite brevemente en un vórtex o invierta los tubos varias veces para mezclarlos completamente a temperatura ambiente.
2. La temperatura de reacción se puede optimizar entre 62°C y 68°C según las condiciones de la imprimación.
3. El experimento deberá realizarse de manera estandarizada, incluyendo la preparación del sistema de reacción, el tratamiento de la muestra y la adición de la muestra.
4. Se sugiere preparar el sistema de reacción en la mesa ultra limpia y agregar plantillas en la campana extractora de otras salas para evitar falsos resultados.