Mezcla maestra de sonda RT-LAMP HYB415
Este producto contiene tampón de reacción, ADN polimerasa Bst y una mezcla de enzimas RT de transcriptasa inversa termoestable, así como componentes de agente protector liofilizado. El tampón de reacción contiene Mg2+, dNTP y otros componentes necesarios para la amplificación. Al usarlo, solo necesita mezclar el tampón, la enzima de reacción, la sonda de cebador y agregar la plantilla; también puede usarse para preparar un sistema de reacción liofilizado. Después de agregar el agente protector de liofilización, puede liofilizarse directamente en un liofilizador. Al usarlo, solo necesita agregar la sonda de cebador y la plantilla. Este reactivo tiene alta eficiencia y sensibilidad de amplificación.
Componentes
| Componentes | 96 T | 960 T | 9600 T |
| Amortiguador de amplificación mediado por bucles | 1 mL | 2,5 mL × 4 | 10 mL×10 |
| Mezcla de enzimas RT | 360 μL | 3,6 ml | 3,6 mL × 10 |
| crioprotector | 1 mL | 2,5 mL × 4 | 10 mL×10 |
Almacenamiento
Almacenar a -25～-15℃, válido por 12 meses.
Instrucciones
1. Saque la solución tampón y descongélela. Agite bien en el vórtex antes de usarla y centrifugue brevemente para recoger el líquido que se deposita en el fondo del tubo.
2. Preparación del sistema de reacción: Este reactivo tiene dos tipos de sistemas de reacción: sistema de reacción líquido y sistema de reacción liofilizado. Elija según el uso específico.
1) Preparación del sistema de reacción líquido
| Componente | Volumen |
| Amortiguador de amplificación mediado por bucles | 10 µL |
| Mezcla de enzimas RT | 3,6 μL |
| Mezcla de sondas de cebado 10×* | 5 μL |
| ARN molde** | X μL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μL |
2) Preparación del sistema de reacción liofilizado
① Preparación del sistema liofilizado
| Componente | Volumen |
| Amortiguador de amplificación mediado por bucles | 10 µL |
| crioprotector | 10 µL |
| Mezcla de enzimas RT | 3,6 μL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 25 μL |
② Liofilización
Liofilizar la mezcla preparada según el sistema de 25 μL.
③ Preparación del sistema de reacción
| Componente | Volumen |
| Productos liofilizados | 1 pieza |
| Mezcla de sondas de cebado 10×* | 5 μL |
| ARN molde** | x μL |
| Agua libre de nucleasas | Hasta 50 μL |
*Concentración de la mezcla de cebadores 10×: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B, 4 μM sonda;
**Se recomienda disolver la plantilla de ácido nucleico en agua tratada con DEPC.
3. Reacción de amplificación
Configure el siguiente programa en un instrumento de PCR fluorescente (como ABI7500, etc.).
| Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| 65℃ | años 60 *Recoger fluorescencia FAM | 30 |
Notas
1. Después de fundir el tampón, puede aparecer un precipitado blanco, que se puede clarificar mezclando bien a temperatura ambiente;
2. La temperatura de reacción se puede optimizar entre 62℃ y 68℃ según la situación del imprimador;
3. El experimento debe llevarse a cabo de manera estandarizada, incluyendo la preparación del sistema de reacción, la liofilización, el procesamiento de la muestra y la adición de la misma.