Super Ultra Nucleasa-HYI222
La Super Ultra Nuclease es una endonucleasa modificada genéticamente, derivada de Serratia marcescens, capaz de degradar ADN o ARN, tanto de doble como de cadena simple, lineal o circular, en una amplia gama de condiciones, transformando completamente los ácidos nucleicos en oligonucleótidos 5'-monofosfato de 3 a 5 bases. Tras la modificación genética, el producto se fermentó, expresó y purificó en E. coli, lo que reduce la viscosidad del sobrenadante y el lisado celular en la investigación científica, mejorando además la eficiencia de purificación y el estudio funcional de la proteína. También puede utilizarse en terapia génica, purificación de virus, producción de vacunas y en la industria farmacéutica de proteínas y polisacáridos como reactivo para la eliminación de ácidos nucleicos residuales del huésped. Este producto no contiene etiquetas, lo que lo hace especialmente adecuado para la eliminación de ácidos nucleicos de proteínas recombinantes marcadas.
Componentes
| Componentes | 10 KU | 100 KU | 500 KU | 5000KU |
| Super Ultra Nucleasa | 16 μL | 160 μL | 0,8 ml | 8 ml |
Características del producto
| CAS No. | 9025-65-4 |
| CE N.º | 3.1.30.2 |
| Peso molecular | 30 kDa |
| Punto isoeléctrico | 6,85 |
| Pureza de la proteína | ≥99% (SDS-PAGE y HPLC) |
| Temperatura óptima | 37°C |
| pH óptimo | 8.0 |
| Actividad de la proteasa | negativo |
| carga biológica |
|
| Proteína residual de la célula huésped | ≤10 ppm |
| Heavy Metal | ≤10 ppm |
| Endotoxina bacteriana |
|
| búfer de almacenamiento | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerol |
Almacenamiento
Transporte a ≤0 °C; almacenamiento a -25 a -15 °C; validez de 2 años (evitar la congelación y descongelación).
Definición de unidad
La cantidad de enzima utilizada para cambiar el valor de absorbancia de A260 en 1,0 en 30 minutos a 37 °C, pH 8,0, equivalente a la digestión de 37 μg de ADN de esperma de salmón mediante corte en oligonucleótidos, se definió como una unidad activa (U).
Control de calidad
- Proteína residual de la célula huésped: kit ELISA
- Residuos de proteasa: 625 KU/mL. La nucleasa Super Ultra reaccionó con el sustrato durante 60 minutos, pero no se detectó actividad.
- Endotoxina bacteriana: prueba LAL, Farmacopea de la República Popular China Volumen 4 (Edición 2020) método de prueba de límite de gel. Reglas generales (1143).
- Carga biológica: Farmacopea de la República Popular China Volumen 4 (Edición 2020)—Reglas generales para la prueba de esterilidad (1101), Norma nacional de la República Popular China, GB 4789.2-2016.
- Metales pesados: ICP-AES, HJ776-2015.
Operación
- La actividad de UltraNuclease se inhibió significativamente cuando la concentración de SDS superó el 0,1% o la concentración de EDTA superó 1 mM.
- Los surfactantes Triton X-100, Tween 20 y Tween 80 no tuvieron ningún efecto sobre las propiedades de la nucleasa cuando la concentración fue inferior al 1,5%.
| Operación | Funcionamiento óptimo | Operación válida |
| Temperatura | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg 2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TDT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-mercaptoetanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Ion metálico monovalente (Na +，K+ etc.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| DESPUÉS4 3- | 0-10 mM | 0-100 mM |
“Óptimo” se define como la condición bajo la cual UltraNuclease retiene > 90% de su actividad. “Eficaz” se define como la condición bajo la cual UltraNuclease retiene > 15% de su actividad.
Uso y dosificación
- Eliminar los ácidos nucleicos exógenos de los productos vacunales reduce el riesgo de toxicidad residual de los ácidos nucleicos y mejora la seguridad del producto.
- Reduce la viscosidad del líquido de alimentación causada por los ácidos nucleicos, acorta el tiempo de procesamiento y aumenta el rendimiento de proteínas.
- Eliminar el ácido nucleico que recubre la partícula (virus, cuerpo de inclusión, etc.), lo cual favorece la liberación y purificación de la partícula.
- El tratamiento con nucleasas puede mejorar la resolución y la recuperación de la muestra para el análisis mediante cromatografía en columna, electroforesis y transferencia en membrana.
- En la terapia génica, se extrae el ácido nucleico para obtener virus adenoasociados purificados.
| Tipo experimental | Producción de proteínas | Virus, Vacuna | Medicamentos celulares |
| Número de células | 1 g de peso húmedo celular (resuspendido) con 10 ml de tampón) | fermentación de 1 litro Sobrenadante líquido | cultivo 1L |
| Dosis mínima | 250U | 100U | 100U |
| Dosis recomendada | 2500U | 25000U | 5000U |
| Función Hora | Reacción recomendada a 37 ℃ durante 15~60 min, o reacción a 25℃ durante 30~120 min | ||
Si la solución tiene una alta salinidad, es ácida o alcalina, o tiene una alta concentración de detergente desnaturalizante, conviene aumentar la cantidad de enzima o prolongar el tiempo de incubación.
Notas
- El almacenamiento de UltraNuclease a 4 °C durante dos semanas no afecta a la actividad biológica; no se recomienda el almacenamiento prolongado a 4 °C.
- Evite la congelación y descongelación a -80 °C; se recomienda almacenar a una temperatura de entre -25 y -15 °C.
- Evite la contaminación por contacto con otras enzimas utilizadas en el diagnóstico molecular durante la aplicación.
- Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes.