Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG HYA422
detalles del producto
Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG es un reactivo especializado diseñado para reacciones de PCR cuantitativa y cualitativa en tiempo real (RT-qPCR) mediante el método basado en sondas. Contiene Superstart Taq plus, una novedosa enzima de arranque en caliente con actividad de polimerasa Taq bloqueada a temperatura ambiente, que inhibe eficazmente la amplificación inespecífica causada por el apareamiento inespecífico de cebadores o la formación de dímeros de cebadores a bajas temperaturas. Esto mejora la especificidad de las reacciones de amplificación y proporciona resultados de detección más estables para plantillas de concentración ultrabaja. Formulado con un tampón optimizado específico para qPCR y un sistema anticontaminación UNG/dUTP, este reactivo genera excelentes curvas estándar en un amplio rango de cuantificación, lo que permite una cuantificación precisa. Previene eficazmente la amplificación falsamente positiva inducida por el arrastre de productos de PCR y la contaminación por aerosoles. Este reactivo es compatible con los instrumentos de PCR en tiempo real de la mayoría de los fabricantes, incluidos Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad y Roche.
Componentes
2×Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG
*Este reactivo ya contiene Superstart Taq plus, UNG, tampón PCR y MgCl2, dNTPs, estabilizadores y otros componentes.
Almacenamiento
Conservar a -20 ℃ para su almacenamiento a largo plazo; se mantiene estable durante 3 meses a 4 ℃. Mezclar bien antes de usar y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Instrucciones
1. Sistema de reacción
| Componentes | 25 µL Volumen | Volumen de 50 µL | Concentración final |
| 2×Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG | 12,5 µL | 25 µL | 1× |
| Mezcla de cebadores y sondas 25×* | 1 µL | 2 µL | 1× |
| ADN molde** | - | - | - |
| ddH2EL | Hasta 25 µL | Hasta 50 µL | - |
Por lo general, una concentración final de cebador de 0,2 μM proporciona resultados satisfactorios; si el rendimiento de la reacción no es satisfactorio, la concentración de cebador se puede ajustar dentro del rango de 0,2 a 1 μM. Generalmente, la concentración de sonda se optimiza dentro del rango de 0,1 a 0,3 μM. Se pueden realizar experimentos de gradiente de concentración para identificar la combinación óptima de cebadores y sondas.
**El número de copias del gen diana varía según el tipo de plantilla de ADN. Si es necesario, se puede realizar una dilución en serie para determinar la cantidad óptima de plantilla de ADN que se debe añadir.
2. Programa de reacción
| Spaso | Ttemperatura | Tiempo | Ciclos |
| Digestión | 50℃ | 2 minutos | 1 |
| Predesnaturalización | 95℃ | 1-5 minutos | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Recocido y extensión | 56~64℃ | 20-60 s |
Control de calidad
1. Pruebas funcionales: sensibilidad, especificidad y repetibilidad de la qPCR.
2. Libre de actividad nucleasa extraña, así como de contaminación por endonucleasas y exonucleasas extrañas.
Información técnicainformación
1. El kit Superstart Probe qPCR Premix plus-UNG incorpora una novedosa enzima de arranque en caliente, que permite un arranque rápido en 1-5 minutos. Su fórmula, con un sistema de tampón especialmente optimizado, lo hace compatible con reacciones de PCR en tiempo real multiplex.
2. Presenta una especificidad mejorada y aumenta significativamente la sensibilidad para la detección de límites en PCR en tiempo real. Esto se traduce en mejoras notables en la normalización de las curvas de amplificación y los valores de fluorescencia para plantillas de concentración ultrabaja, lo que lo hace idóneo para su uso como reactivo de detección de PCR en tiempo real de alta sensibilidad.
3. Para cebadores con bajas temperaturas de hibridación o para la amplificación de fragmentos largos que superen los 200 pb, se recomienda el protocolo de PCR de tres pasos.
4. Los distintos genes diana varían en su eficiencia de utilización de dUTP y en su sensibilidad a la enzima UNG. Por lo tanto, si el uso del sistema UNG reduce la sensibilidad de detección, el sistema de reacción debe ajustarse y optimizarse en consecuencia.
5. Utilice áreas y pipetas específicas para las etapas previas y posteriores a la amplificación. Trabaje con guantes y cámbielos con frecuencia. No abra los tubos de reacción una vez finalizada la PCR para minimizar la contaminación de las muestras con los amplicones de la PCR.
6. ¡Solo para fines de investigación!