ARN ligasa T4 2 HYJ237
La T4 ARN ligasa 2, también conocida como T4 ARN ligasa 2, es una ligasa de ARN bicatenario dependiente de ATP (dsRNA ligasa), capaz de realizar tanto la ligación circular intramolecular como la ligación lineal intermolecular de ARN bicatenario. A diferencia de la T4 ARN ligasa 1, la T4 ARN ligasa 2 presenta una actividad de ligación significativamente mayor hacia las muescas dentro del ARN bicatenario que hacia los extremos del ARN monocatenario. La T4 ARN ligasa 2 también puede utilizarse para conectar el grupo hidroxilo 3' de una cadena de ARN con el grupo fosfato 5' de una cadena de ADN, ya sea de forma intramolecular o intermolecular dentro de ácidos nucleicos bicatenarios (dúplex de ARN, híbridos de ARN/ADN o dúplex de ADN). La ARN ligasa 2 de T4 requiere tanto un grupo fosfato en 5' como un grupo hidroxilo en 3', lo que permite la reacción de ligación entre el grupo fosfato en 5' de una cadena de ARN o ADN y el grupo hidroxilo en 3' de una cadena de ARN. Se utiliza principalmente para unir muescas en ARN de doble cadena (ligación de extremos cohesivos de ARN de doble cadena). También puede utilizarse para unir muescas en estructuras de doble cadena, como el grupo hidroxilo en 3' del ARN y el grupo fosfato en 5' del ADN. La ARN ligasa 2 de T4 es una proteína recombinante expresada en Escherichia coli. El gen expresado deriva del bacteriófago T4.
Componentes
| Componentes | 1KEN | 5KEN |
| ARN ligasa T4 2 (10 U/µL) | 100 µL | 500 µL |
| Tampón de reacción 10× | 300 µL | 1,5 ml |
| ddH libre de RNasa2EL | 1 mL | 5 ml |
Almacenamiento
Conservar entre -25 y -15 °C. Válido por 1 año.
Búfer de almacenamiento
10 mM Tris-HCl (pH 7,5), 50 mM KCl, 35 mM (NH4)2ENTONCES4, 0,1 mM EDTA, 0,1 mM DTT, 50 % (v/v) glicerol.
Definición de actividad
Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para ligar 0,4 µg de una mezcla equimolar de ARN de 23 y 17 nucleótidos en 20 µL a 37 °C en 30 minutos.
Control de calidad
1. Libre de contaminación por RNasa y DNasa.
2. La pureza de la ARN ligasa 2 T4 es superior al 90%, según lo determinado mediante electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS teñida con azul brillante de Coomassie.