ADN polimerasa Taq HYA110
La ADN polimerasa Taq es una ADN polimerasa altamente termoestable derivada de la bacteria termófila Thermus aquaticus. La reacción enzimática requiere la participación de Mg2+y puede catalizar la polimerización de desoxinucleótidos en dirección 5' a 3', según la plantilla de ADN. La ADN polimerasa Taq desarrollada por nuestra empresa es una proteína enzimática de alta pureza obtenida mediante la expresión recombinante del gen de la ADN polimerasa de Thermus aquaticus en Escherichia coli y su purificación mediante cromatografía de separación en múltiples etapas. Posee las mismas propiedades que la ADN polimerasa Taq natural.
Componentes
1. 5 U/µL Taq ADN polimerasa
2. 10×PCRBuffer(Mg2+ (gratis) (opcional)
3. 25 mMgCl2(opcional)
*Tampón PCR 10× (Mg2+ libre) no contiene dNTP ni Mg2+Por favor, añada dNTPs y MgCl2al preparar el sistema de reacción.
Actividad Definición
Una unidad de actividad (U) se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 10 nmol de desoxinucleótidos en material insoluble en ácido, utilizando ADN de esperma de salmón activado como plantilla/cebador, en condiciones de 74 ℃ durante 30 minutos.
Almacenamiento
Almacenar a -20 ℃ para su conservación a largo plazo. Mezclar bien antes de usar y evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.
Control de calidad
1. Pureza electroforética por SDS-PAGE ≥ 98%.
2. Sensibilidad de amplificación, variación entre lotes y estabilidad.
3. Libre de actividad nucleasa extraña, así como de contaminación por endonucleasas y exonucleasas extrañas.
Instrucciones
1. Sistema de reacción PCR
| Componentes | Volumen | Concentración en la mezcla maestra |
| 10 × Tampón PCR (Mg2+gratis)* | 5 µL | 1× |
| dNTPs (10 mM de cada dNTP) | 1 μL | 200 µM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/µL de ADN polimerasa Taq | 0,25-0,5 μL | 1,25-2,5 U |
| Mezcla de imprimación 25×** | 2 μL | 1× |
| Plantilla | — — |
|
| ddH2EL | Hasta 50 µL | — — |
*El tampón PCR 10 × no contiene dNTPs ni Mg²⁺, y debe complementarse con dNTPs y MgCl₂ antes de su uso.
**Si se utiliza para qPCR/qRT-PCR, se debe añadir una sonda fluorescente al sistema de reacción. Generalmente, una concentración final de cebador de 0,2 μM proporciona resultados óptimos; si el rendimiento de la reacción no es satisfactorio, la concentración del cebador se puede ajustar en el rango de 0,2 a 1 μM. Por lo general, la concentración de la sonda se optimiza entre 0,1 y 0,3 μM. Se pueden realizar experimentos de gradiente de concentración para identificar la combinación óptima de cebadores y sondas.
2. Reacción Programa
| Tresmétodo paso a paso | |||
| Paso | Temperatura | Tiempo | Ciclos |
| Predesnaturalización | 95 ℃ | 30 s | 1 |
| Desnaturalización | 95 ℃ | 10-20 s | 35-50 |
| Recocido | 56~64℃ | 10-30 s | |
| Extensión | 72℃ | 10-60 s | |
Especificaciones técnicas
1. Tiene actividad polimerasa 5'-3' y actividad exonucleasa 5'-3'; no tiene actividad exonucleasa 3'-5' ni función de corrección de pruebas.
2. A 70~75℃, la tasa de extensión es de 1~2 kb/min.
3. El extremo 3' del producto de PCR es A, y el producto se puede clonar directamente en un vector T.
4. Es adecuado para la detección cualitativa y cuantitativa de PCR y RT-PCR convencionales.
5. Es adecuado para la detección cuantitativa por PCR de fluorescencia, la secuenciación de ADN, etc.
6. ¡Solo para fines de investigación!