Ultra Nucleasa de grado GMP
UltraNuclease de grado GMP se expresa y purifica en Escherichia coli (E. coli) mediante ingeniería genética y se prepara en entornos GMP. Puede reducir la viscosidad del sobrenadante y el lisado celular en la investigación científica, aumentar la eficiencia de la purificación de proteínas y mejorar la investigación funcional de las proteínas. El producto también puede reducir los residuos de ácidos nucleicos del huésped a grado pg, mejorando el rendimiento y la seguridad de los productos biológicos en aplicaciones como la purificación de virus, la fabricación de vacunas y la fabricación de productos farmacéuticos de proteínas/polisacáridos. Además, el producto también puede utilizarse para prevenir la aglutinación de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) en terapia celular y desarrollo de vacunas.
UltraNuclease se suministra como reactivo esterilizado, eluido en tampón (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 2 mM MgCl, 20 mM NaCl, 50 % glicerina), con apariencia de líquido transparente e incoloro. Este producto se elabora conforme a las normas GMP y se suministra en forma líquida.
Componentes
UltraNuclease de grado GMP (250 U/μL)
Condiciones de almacenamiento
El producto se envía con hielo seco y puede almacenarse a una temperatura de entre -25 °C y -15 °C durante dos años.
Si el producto se ha abierto y se ha almacenado a 4℃ durante más de una semana, recomendamos filtrarlo para evitar la contaminación microbiana.
Presupuesto
| Host de expresión | E. coli recombinante con gen UltraNuclease |
| Peso molecular | 26,5 kDa |
| Punto eléctrico | 6. 85 |
| Pureza | ≥99% (SDS-PAGE) |
| búfer de almacenamiento | 20 mM Tris-HClpH8. 0, 2 mM MgCb, 20 mM NaCl, 50% glicerina |
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Definición de unidad | La definición de una unidad de actividad (U) es la cantidad de enzima utilizada para cambiar el valor de absorción de ΔA260 en 1,0 en 30 minutos en un sistema de reacción de 2,625 mL a 37 °C con un pH de 8,0 (equivalente a la digestión completa de 37 μg de ADN de esperma de salmón en oligonucleótidos). |
Instrucciones
1. Muestra Recopilación
Células adherentes: retire el medio, lave las células con PBS y retire el sobrenadante.
Células en suspensión: recoja las células mediante centrifugación, lávelas con PBS, centrifugue a 6000 rpm durante 10 minutos y recoja el sedimento.
Escherichia coli: recoja las bacterias mediante centrifugación, lave una vez con PBS, centrifugue a 8000 rpm durante 5 minutos y recoja el sedimento.
2. Tratamiento de muestra
Tratar los sedimentos celulares recolectados con tampón de lisis en una proporción de masa (g) a volumen (mL) de 1:(10-20), o mediante métodos mecánicos o químicos en hielo o a temperatura ambiente (1 g de sedimento celular contiene aproximadamente
109 células).
3. Tratamiento enzimático
Agregue 1-5 mM de MgCl al sistema de reacción y ajuste el pH a 8-9.
Añada UltraNuclease en una proporción de 250 unidades para digerir 1 g de sedimento celular e incube a 37 °C durante más de 30 minutos. Consulte el formulario «Tiempo de reacción recomendado» para seleccionar la duración del tratamiento.
4. Sobrenadante Recopilación
Centrifugar a 12.000 rpm durante 30 minutos y recoger el sobrenadante.
Nota: Si la solución es ácida o alcalina, o contiene altas concentraciones de sal, detergentes o desnaturalizantes, aumente la dosis de enzima o prolongue el tiempo de tratamiento según corresponda.
Condiciones de reacción recomendadasnosotros
| Parámetro | Condición óptima | Acondicionador eficaz |
| Concentración de Mg²+ | 1-5 mM | 1-10 mM |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| Temperatura | 37°℃ | 0-42℃ |
| Concentración de DTT | 0-100 mM | >0 mM |
| Concentración de mercaptoetanol | 0-100 mM | >0 mM |
| Concentración de cationes monovalentes | 0-20 mM | 0-150 mM |
| Concentración de iones de fosfato | 0-10 mM | 0-100 mM |
Recomendado Reacción Tiempo (37℃, 2 mM Mg²+, pH 8.0)
| Cantidad de UltraNuclease (Concentración final) | Tiempo de reacción |
| 0,25 U/mL | >10 h |
| 2,5 U/ml | >4h |
| 25 U/mL | 30 minutos |
Notas:
¡Por favor, utilice el equipo de protección personal (EPP) necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad!
