Ultranucleasa-HYI221
Ultra Nuclease es una endonucleasa modificada genéticamente, derivada de Serratia marcescens, capaz de degradar ADN o ARN, tanto de cadena simple como doble, lineal o circular, en una amplia gama de condiciones. Degradó completamente los ácidos nucleicos en oligonucleótidos 5'-monofosfato de 3 a 5 bases. Tras la modificación genética, el producto se fermentó, expresó y purificó en E. coli, lo que reduce la viscosidad del sobrenadante y el lisado celular en la investigación científica, además de mejorar la eficiencia de purificación y la investigación funcional de la proteína. También puede utilizarse en terapia génica, purificación de virus, producción de vacunas y en la industria farmacéutica de proteínas y polisacáridos como reactivo para la eliminación de residuos de ácidos nucleicos del huésped.
Componentes
| Componentes | 5 A | 50KU | 500 KU | 5000KU |
| Ultranucleasa | 20 μL | 200 μL | 2 ml | 20 ml |
Características del producto
| CAS No. | 9025-65-4 |
| CE N.º | 3.1.30.2 |
| Peso molecular | 30 kDa |
| Punto isoeléctrico | 6,85 |
| Pureza de la proteína | ≥99% (SDS-PAGE y SEC-HPLC) |
| Actividad específica | ≥1,1×106U/mg |
| Temperatura óptima | 37°C |
| pH óptimo | 8.0 |
| Actividad de la proteasa | negativo |
| carga biológica |
|
| Proteína residual de la célula huésped | ≤10 ppm |
| Heavy Metal | ≤10 ppm |
| Endotoxina bacteriana |
|
| búfer de almacenamiento | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerol |
Almacenamiento
Transporte a ≤0 °C; almacenamiento a -25 a -15 °C; validez de 2 años (evitar la congelación y descongelación).
Definición de unidad
La cantidad de enzima utilizada para cambiar el valor de absorbancia de A260 en 1,0 en 30 minutos a 37 °C, pH 8,0, equivalente a la digestión de 37 μg de ADN de esperma de salmón mediante corte en oligonucleótidos, se definió como una unidad activa (U).
Control de calidad
- Proteína residual de la célula huésped: kit ELISA
- Residuos de proteasa: 250 KU/mL. La Ultra Nuclease reaccionó con el sustrato durante 60 minutos, pero no se detectó actividad.
- Endotoxina bacteriana: prueba LAL, Farmacopea de la República Popular China Volumen 4 (Edición 2020) método de prueba de límite de gel. Reglas generales (1143).
- Carga biológica: Farmacopea de la República Popular China Volumen 4 (Edición 2020)—Reglas generales para la prueba de esterilidad (1101), Norma nacional de la República Popular China, GB 4789.2-2016.
- Metales pesados: ICP-AES, HJ776-2015.
Operación
- La actividad de UltraNuclease se inhibió significativamente cuando la concentración de SDS superó el 0,1% o la concentración de EDTA superó 1 mM.
- Los surfactantes Triton X-100, Tween 20 y Tween 80 no tuvieron ningún efecto sobre las propiedades de la nucleasa cuando la concentración fue inferior al 1,5%.
| Operación | Funcionamiento óptimo | Operación válida |
| Temperatura | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg 2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| TDT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-mercaptoetanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Ion metálico monovalente (Na +，K+ etc.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| DESPUÉS4 3- | 0-10 mM | 0-100 mM |
“Óptimo” se define como la condición bajo la cual UltraNuclease retiene > 90% de su actividad. “Eficaz” se define como la condición bajo la cual UltraNuclease retiene > 15% de su actividad.
Uso y dosificación
- Eliminar los ácidos nucleicos exógenos de los productos vacunales reduce el riesgo de toxicidad residual de los ácidos nucleicos y mejora la seguridad del producto.
- Reduce la viscosidad del líquido de alimentación causada por los ácidos nucleicos, acorta el tiempo de procesamiento y aumenta el rendimiento de proteínas.
- Eliminar el ácido nucleico que recubre la partícula (virus, cuerpo de inclusión, etc.), lo cual favorece la liberación y purificación de la partícula.
- El tratamiento con nucleasas puede mejorar la resolución y la recuperación de la muestra para el análisis mediante cromatografía en columna, electroforesis y transferencia en membrana.
- En la terapia génica, se extrae el ácido nucleico para obtener virus adenoasociados purificados.
| Tipo experimental | Producción de proteínas | Virus, Vacuna | Medicamentos celulares |
| Número de células | 1 g de peso húmedo celular (resuspendido) con 10 ml de tampón) | fermentación de 1 litro Sobrenadante líquido | cultivo 1L |
| Dosis mínima | 250U | 100U | 100U |
| Dosis recomendada | 2500U | 25000U | 5000U |
| Función Hora | Reacción recomendada a 37 ℃ durante 15~60 min, o reacción a 25℃ durante 30~120 min | ||
Si la solución tiene una alta salinidad, es ácida o alcalina, o tiene una alta concentración de detergente desnaturalizante, conviene aumentar la cantidad de enzima o prolongar el tiempo de incubación.
Notas
- El almacenamiento de UltraNuclease a 4 °C durante dos semanas no afecta a la actividad biológica; no se recomienda el almacenamiento prolongado a 4 °C.
- Evite la congelación y descongelación a -80 °C; se recomienda almacenar a una temperatura de entre -25 y -15 °C.
- Evite la contaminación por contacto con otras enzimas utilizadas en el diagnóstico molecular durante la aplicación.
- Por su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes.