Uracilo-ADN glicosilasa (UNG) HYA313
La uracilo-ADN glicosilasa (UNG o UDG) se deriva de la expresión del clon recombinante de E. coli,Con un peso molecular de 25 kDa, cataliza la liberación de uracilo libre del ADN monocatenario y bicatenario que lo contiene. No tiene actividad sobre el ARN y puede utilizarse para prevenir la contaminación causada por productos de amplificación de PCR. Su mecanismo de acción se basa en lo siguiente: si se utiliza dUTP en lugar de dTTP para su incorporación al ADN en la reacción de PCR, se forma un producto de amplificación que contiene la base dU. La enzima puede romper selectivamente el enlace glucosídico de la base U en el ADN monocatenario y bicatenario, y degradar el producto de amplificación de PCR.
Componentes
| Componente | 100 U | 1000 U | 5000 U |
| 1 U/µL de uracilo-ADN glicosilasa | 100 µL | 1 mL | 5 ml |
Almacenamiento
Almacenar entre -25°C y -15°C.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que degrada 1 µg de ADN monocatenario que contiene dU en 1 hora a 37 °C.
Control de calidad
1. Pureza de la electroforesis SDS-PAGE superior al 98%.
2. Actividad de degradación, variación entre lotes y estabilidad.
3. Después de tratar 1U de UNG a 50℃ durante 2 min, las plantillas que contienen U con menos de 103Las copias deben estar completamente degradadas y no se pueden producir productos de amplificación.
4. Ausencia de actividad nucleasa exógena.
Notas
1. La enzima UNG se puede utilizar antes de la reacción de amplificación por PCR para eliminar los productos amplificados de dUTP contaminados en el sistema de reacción y así evitar resultados falsos positivos causados por la contaminación del producto.
2. La temperatura óptima para que la enzima UNG se utilice en la reacción de PCR anticontaminación es generalmente de 50 ℃, el tiempo es de 2 min; la condición de inactivación es de 95 ℃ 5 min.
3. Debe evitarse la congelación y descongelación repetidas, y no exponerlo a un ambiente con grandes fluctuaciones de temperatura.
4. Los distintos genes que se van a amplificar presentan diferente eficiencia en la utilización de dUTP y distinta sensibilidad a la enzima UNG. Por lo tanto, si el uso del sistema UNG reduce la sensibilidad de detección, se debe ajustar y optimizar el sistema de reacción. Si necesita asistencia técnica, póngase en contacto con nuestra empresa.