Enzima de recubrimiento del virus vaccinia HYJ231
La enzima de capping del virus vaccinia, derivada de una cepa recombinante de Escherichia coli portadora del MR del virus vaccinia, consta de dos subunidades, D1R y D12L, y posee tres actividades enzimáticas: ARN trifosfatasa, guanililtransferasa y guanina metiltransferasa. Esta enzima cataliza la formación de una estructura cap, añadiendo específicamente una estructura cap de 7-metilguanilato (m7Gppp, Cap 0) al extremo 5' del ARN. La estructura cap (Cap 0) desempeña un papel crucial en la estabilidad, el transporte y la traducción del ARNm eucariota. El capping enzimático del ARN es un método eficaz y sencillo que puede mejorar significativamente la estabilidad y la capacidad de traducción del ARN para la transcripción in vitro, la transfección y la microinyección.
Componentes
| Componentes | 2KEN | 10KEN | 100A | 1000KU |
| Enzima de encapsulación del virus vaccinia (10 U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 ml | 100 ml |
| Amortiguador de taponamiento 10× | 0,4 mL | 2×1 ml | 2×10 mL | 2×100 ml |
Almacenamiento
Conservar entre -25 y -15 °C. Válido durante 2 años (evitar la congelación y descongelación repetidas).
Búfer de almacenamiento
20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 0,1% Triton X-100, 50% glicerol.
Definición de actividad
Una unidad (U) de actividad se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar completamente 10 pmol de GTP en un transcrito de 80 nt en 1 h a 37 °C.
Control de calidad
1. Actividad exonucleasa: Cuando se hicieron reaccionar 10 U de este producto con 1 μg de ADN digerido con λ-Hind III a 37 °C durante 16 horas, la banda electroforética del ADN permaneció inalterada.
2. Actividad endonucleasa: Cuando se hicieron reaccionar 10 U de este producto con 1 μg de ADN λ a 37 °C durante 16 horas, la banda electroforética del ADN permaneció inalterada.
3. Actividad de la nicarasa: Cuando se hicieron reaccionar 10 U de este producto con 1 μg de pBR322 a 37 °C durante 16 horas, la banda electroforética del ADN permaneció inalterada.
4. Actividad de la ARNasa: Cuando se hicieron reaccionar 10 U de este producto con 1,6 μg de ARN MS2 a 37 °C durante 4 horas, la banda electroforética del ARN permaneció inalterada.
5.ADN residual de E. coli: Se detectó ácido nucleico residual en 10 U de este producto mediante qPCR TaqMan específica para el ADNr 16S de E. coli, y el residuo del genoma de E. coli fue ≤1 copia;
6. Endotoxina: LAL-Test, Farmacopea China Edición 2020 Parte IV Reglas generales de la prueba de límite de gel (1143), contenido de endotoxina bacteriana ≤ 10 EU/mg.