Polimerasa de ADN Bst 2.0 de inicio en caliente (sin glicerol) HYB113
La ADN polimerasa Bst 2.0 se deriva de Bacillus stearothermophilusLa ADN polimerasa I, que tiene actividad de ADN polimerasa 5´→3´ y una fuerte actividad de reemplazo de cadena, pero no actividad de exonucleasa 5´→3´. La ADN polimerasa Bst 2.0 es ideal para el desplazamiento de cadena, la amplificación isotérmica mediada por bucles (LAMP) y la secuenciación rápida. La ADN polimerasa Bst 2.0 de inicio en caliente es una versión de inicio en caliente de la ADN polimerasa Bst 2.0 obtenida mediante tecnología de modificación reversible. Puede inhibir la actividad de la ADN polimerasa a temperatura ambiente, por lo que el sistema de reacción puede operarse y prepararse a temperatura ambiente para prevenir la amplificación inespecífica y mejorar la eficiencia de la reacción. Esta versión también puede liofilizarse. Además, su actividad puede liberarse a alta temperatura, por lo que no es necesario un paso de activación separado.
Componentes
| Componentes | 1600U | 8000U | 80000U |
| Polimerasa de ADN Bst 2.0 de inicio en caliente (sin glicerol) (8 U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 ml |
| 10×HH Bst 2.0 Amortiguador | 1,5 ml | 2 × 1,5 mL | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 mL | 2 × 10 mL |
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse a una temperatura de entre -25 y -15 °C.
Definición de unidad
Una unidad se define como la cantidad de enzima que incorpora 25 nmol de dNTP en material insoluble en ácido en 30 minutos a 65 °C.
Control de calidad
1. Ensayo de pureza de proteínas (SDS-PAGE):La pureza de la ADN polimerasa Bst 2.0 es ≥ 99%, determinada mediante análisis SDS-PAGE.
2. Actividad endonucleasa:La incubación de una reacción de 50 μL que contiene un mínimo de 8 U de ADN polimerasa Warm Start Bst 2.0 con 1 μg de λADN durante 16 horas a 37 ℃ no produce degradación detectable, según se ha determinado.
3. Actividad exonucleasa:La incubación de una reacción de 50 μL que contiene un mínimo de 8 U de polimerasa Warm Start Bst DNA 2.0 con 1 μg de ADN digerido con λ -Hind Ⅲ durante 16 horas a 37℃ no produce degradación detectable, según lo determinado.
4. Actividad de la nickasa:La incubación de una reacción de 50 μL que contiene un mínimo de 8 U de ADN polimerasa Warm Start Bst 2.0 con 1 μg de ADN pBR322 durante 16 horas a 37 °C no produce degradación detectable, según se ha determinado.
5. Actividad de la ARNasa:La incubación de una reacción de 50 μL que contiene un mínimo de 8 U de ADN polimerasa Warm Start Bst 2.0 con 1,6 μg de ARN MS2 durante 16 horas a 37 °C no produce degradación detectable, según se ha determinado.
6. E. coli ADN: Se analizan 120 U de la polimerasa Warm Start Bst DNA 2.0 para detectar la presencia de E. coli ADN genómico mediante qPCR TaqMan con cebadores específicos para el E. coliLocus del ARNr 16S. El E. coliLa contaminación por ADN genómico es ≤ 1 copia.
Instrucciones
1. Sistema de reacción
| Componentes | Volumen |
| 10×HH Bst 2.0 Amortiguador | 2,5 µL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 µL |
| dNTPs (10 mM cada uno) | 3,5 µL |
| SYTOTM16 Verde (25×)* | 1 µL |
| Mezcla de imprimación** | 6 µL |
| Polimerasa de ADN Bst 2.0 de inicio en caliente (sin glicerol) (8 U/μL) | 1 µL |
| Plantilla | × μL |
| ddH2EL | Hasta 25 μL |
*SYTOTM 16 Verde (25 ×): Según las necesidades experimentales, se pueden utilizar otros colorantes como sustitutos;
**Mezcla de cebadores: obtenida mezclando volúmenes iguales de 20 µM de FIP, 20 µM de BIP, 2,5 µM de F3, 2,5 µM de B3, 5 µM de LF, 5 µM de LB.
2. Condición de reacción
1 × HH Bst 2.0 Tampón, la temperatura de incubación está entre 60 °C y 65 °C.
3. Inactivación por calor
80°C, 20 minutos.
Solicitud
1. Amplificación isotérmica LAMP;
2. Reacción de desplazamiento simple de la cadena de ADN;
3. Secuenciación de genes con alto contenido de GC;
4. Secuenciación de ADN a nivel de nanogramos.