2× PCR eelsegu (värvainega) HYA442
2× PCR Master Mix sisaldab Taq DNA polümeraasi, dNTP-sid ja teisi PCR-iks vajalikke komponente. Master Mix on meie kohandatud stabilisaatoritega stabiilne 3 kuud temperatuuril 4 ℃. Eelnevalt segatud lahus on optimeeritud tavapärase PCR-i jaoks ja on kasutusvalmis DNA matriitsi ja praimerite lisamise teel. PCR-produkte saab elektroforeesiks otse laadida eelnevalt laaditud bromofenoolsinise värvainega. Amplifitseeritud produktid sisaldavad 3'-dA eendit ja neid saab hõlpsalt T-vektorisse kloonida. 2× PCR Master Mix lihtsustab PCR-protseduuri ja vähendab saastumist.
Komponendid
| Komponendid | Suurus-1 | Suurus 2 | Suurus-3 |
| 2× PCR eelsegu (värvainega) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Ladustamine
Hoida temperatuuril -20°C 2 aastat.
Juhised
1. Reaktsioonisüsteem
| Komponendid | Maht |
| 2× PCR eelsegu (värvainega) | 25 μL |
| Edasine praimer (10 μM) | 2 µL |
| Pöördpraimer (10 μM) | 2 µL |
| DNA mall* | Muutuja |
| ddH2THE | Kuni 50 µL |
*Malli kasutus: 50-200 ng genoomset DNA-d; 0,1-10 ng plasmiidset DNA-d
2. Reaktsiooniprogramm
| Samm | Temperatuur | Aeg | Tsüklid |
| Esialgne denaturatsioon | 94 ℃ | 5 minutit | 1 |
| Denaturatsioon | 94 ℃ | 30 sekundit | 35 |
| Lõõmutamine | 50–60 ℃ | 30 sekundit | |
| Laiendus | 72 ℃ | 30–60 sekundit/kb | |
| Lõplik pikendus | 72 ℃ | 10 minutit | 1 |
| Hoidke | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ kontsentratsioon: See toode sisaldab 3 mM MgCl22, sobib enamiku PCR-reaktsioonide jaoks.
2. Lõõmutamistemperatuur: Palun vaadake praimerite teoreetilist Tm väärtust. Lõõmutamistemperatuuri saab seadistada 2–5 ℃ madalamaks kui praimerite teoreetiline väärtus.
3. Pikendusaeg: Molekulaarseks identifitseerimiseks on soovitatav 30 sekundit/kb. Geenikloonimiseks on soovitatav 60 sekundit/kb.
Märkused
1. 2× PCR Master Mixiga PCR-produktid ei sobi polüakrüülamiidgeelelektroforeesiks.
2. Teie ohutuse ja tervise huvides kandke töötamise ajal laborikitlit ja ühekordseid kindaid.
3. Seda kasutatakse AINULT teaduslikuks otstarbeks!