2× PCR Aurre-nahasketa (koloratzailearekin) HYA442
2× PCR Master Mix-ak Taq DNA Polimerasa, dNTPak eta PCRrako beharrezkoak diren beste osagai batzuk ditu. Master Mix-a 3 hilabetez egonkorra da 4℃-tan gure egonkortzaile pertsonalizatuekin. Aurre-nahasketa soluzioa PCR konbentzionalerako optimizatuta dago eta erabiltzeko prest dago DNA txantiloia eta primerrak gehituz. PCR produktuak zuzenean kargatu daitezke elektroforesirako aurrez kargatutako bromofenol urdin koloratzailearekin. Anplifikatutako produktuek 3'-dA irtengunea dute eta erraz klonatu daitezke T bektorean. 2× PCR Master Mix-ak PCR prozedura sinplifikatzen du eta kutsadura murrizten du.
Osagaiak
| Osagaiak | 1. tamaina | 2. tamaina | 3. tamaina |
| 2× PCR premisak (koloratzailearekin) | 5 ml | 1 mL × 15 | 1 mL × 50 |
Biltegiratzea
Gorde -20 °C-tan 2 urtez.
Argibideak
1. Erreakzio-sistema
| Osagaiak | Bolumena |
| 2× PCR premisak (koloratzailearekin) | 25 µL |
| Aurrerako primerra (10 μM) | 2 µL |
| Alderantzizko primerra (10 μM) | 2 µL |
| DNA Txantiloia* | Aldagaia |
| ddH2THE | 50 µL arte |
*Tantiloiaren erabilera: 50-200 ng-ko DNA genomikoa; 0,1-10 ng-ko DNA plasmidoa
2. Erreakzio Programa
| Urratsa | Tenperatura | Denbora | Zikloak |
| Hasierako desnaturalizazioa | 94 ℃ | 5 minutu | 1 |
| Desnaturalizazioa | 94 ℃ | 30 segundo | 35 |
| Erreketa | 50-60 ℃ | 30 segundo | |
| Luzapena | 72 ℃ | 30-60 seg/kb | |
| Azken luzapena | 72 ℃ | 10 minutu | 1 |
| Eutsi | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ kontzentrazioa: Produktu honek 3 mM MgCl dauka2, PCR erreakzio gehienetarako egokia.
2. Erreketa-tenperatura: Mesedez, kontsultatu primerren Tm balio teorikoa. Erreketa-tenperatura primeraren balio teorikoa baino 2-5 ℃ baxuagoa ezar daiteke.
3. Luzapen-denbora: Identifikazio molekularra egiteko, 30 seg/kb gomendatzen da. Geneen klonaziorako, 60 seg/kb gomendatzen da.
Oharrak
1. 2× PCR Master Mix duten PCR produktuak ez dira egokiak poliakrilamida gel elektroforesirako.
2. Zure segurtasunerako eta osasunerako, mesedez, erabili laborategiko bata eta botatzeko eskularruak eragiketa egiteko.
3. Ikerketarako SOILIK erabiltzen da!