2× PCR-esiseos (väriaineella) HYA442
2× PCR Master Mix sisältää Taq DNA-polymeraasin, dNTP:t ja muut PCR:ssä tarvittavat komponentit. Master Mix on stabiili 3 kuukautta 4 ℃:ssa räätälöityjen stabilointiaineidemme kanssa. Esisekoitusliuos on optimoitu tavanomaiseen PCR:ään ja käyttövalmis lisäämällä DNA-templaatti ja alukkeet. PCR-tuotteet voidaan ladata suoraan elektroforeesia varten esiladatulla bromifenolisinisellä väriaineella. Monistetut tuotteet sisältävät 3'-dA-ulokkeen ja ne voidaan helposti kloonata T-vektoriin. 2× PCR Master Mix yksinkertaistaa PCR-toimenpidettä ja vähentää kontaminaatiota.
Komponentit
| Komponentit | Koko 1 | Koko 2 | Koko 3 |
| 2× PCR-esiseos (väriaineella) | 5 ml | 1 ml × 15 | 1 ml × 50 |
Säilytys
Säilytä -20 °C:ssa 2 vuotta.
Ohjeet
1. Reaktiojärjestelmä
| Komponentit | Äänenvoimakkuus |
| 2× PCR-esiseos (väriaineella) | 25 mikrolitraa |
| Eteenpäin suuntautuva aluke (10 μM) | 2 µL |
| Käänteinen aluke (10 μM) | 2 µL |
| DNA-templaatti* | Muuttuja |
| ddH2THE | Jopa 50 µL |
* Mallin käyttö: 50-200 ng genomista DNA:ta; 0,1-10 ng plasmidi-DNA:ta
2. Reaktio-ohjelma
| Vaihe | Lämpötila | Aika | Syklit |
| Alkuperäinen denaturointi | 94 ℃ | 5 minuuttia | 1 |
| Denaturointi | 94 ℃ | 30 sekuntia | 35 |
| Hehkutus | 50–60 ℃ | 30 sekuntia | |
| Laajennus | 72 ℃ | 30–60 sekuntia/kb | |
| Lopullinen jatkoaika | 72 ℃ | 10 minuuttia | 1 |
| Pidä | 4 ℃ | - | 1 |
1. Mg2+ pitoisuus: Tämä tuote sisältää 3 mM MgCl2:ta2sopii useimpiin PCR-reaktioihin.
2. Hehkutuslämpötila: Katso alukkeiden teoreettista Tm-arvoa. Hehkutuslämpötila voidaan asettaa 2–5 ℃ alemmaksi kuin alukkeen teoreettinen arvo.
3. Pidennysaika: Molekyylitunnistukseen suositellaan 30 sekuntia/kb. Geenikloonaukseen suositellaan 60 sekuntia/kb.
Muistiinpanoja
1. 2× PCR Master Mixiä sisältävät PCR-tuotteet eivät sovellu polyakryyliamidigeelielektroforeesiin.
2. Turvallisuutesi ja terveytesi vuoksi käytä laboratoriotakkia ja kertakäyttökäsineitä työskentelyn aikana.
3. Sitä käytetään VAIN tutkimuskäyttöön!