Mélange PCR HiFi 2× pour NGS HYA446
L'ADN polymérase HiFi est une polymérase typique de la famille B, dotée d'une structure unique. Cette nouvelle enzyme, similaire à Pyrococcus furiosus, est fusionnée à un domaine d'amélioration de la synthèse continue, ce qui optimise l'élongation, le rendement et la spécificité. L'ADN polymérase HiFi est équipée d'anticorps spécifiques, inhibant efficacement l'amplification non spécifique et améliorant sa stabilité. Elle possède une activité de synthèse continue 5'-3' et une activité exonucléase 3'-5', et ses produits amplifiés présentent des extrémités franches. L'ADN polymérase HiFi est une polymérase mutante, modifiée par génie génétique. Elle est capable d'incorporer du dUTP et d'amplifier des matrices complexes contenant du dU. Le mélange PCR HiFi 2× pour NGS est un mélange 2× facile à utiliser, contenant le mélange PCR HiFi 2×, un tampon, du Mg²⁺ et des dNTP. Seuls l'ADN matrice, les amorces et l'eau sont nécessaires pour l'amplification. Tous les lots de mélange PCR 2× HiFi pour NGS ont subi un contrôle de qualité strict afin de garantir la performance stable de chaque lot de réactifs.
Composants
| Composants | Taille-1 | Taille-2 |
| Mélange PCR HiFi 2× pour NGS | 24T | 96T |
Stockage
Conserver à -20℃.
Système de réaction
| Composants | Dansolume |
| Mélange PCR HiFi 2× pour NGS | 25 µL |
| ADN matrice* | X uL |
| Amorce directe (20 µM)** | 2,5 µL |
| Amorce inverse (20 µM) ** | 2,5 µL |
| Eau sans nucléase | Jusqu'à 50 µL |
*Le modèle d'ADN désigne le produit purifié du lieur connecté aux billes magnétiques lors du processus de construction de la bibliothèque.
**Les amorces sont les amorces de bibliothèque utilisées dans le processus de construction de la bibliothèque NGS.
Conditions de réaction
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| Prédénaturation | 98 °C | 45 secondes | 1 |
| Dénaturation | 98 °C | 15 s | Nombre de cycles recommandé en fonction de l'entrée* |
| recuit | 60 °C | 30 s | |
| Extension | 72℃ | 30 s | |
| Prise | 72℃ 4-10℃ | 1 min ∞ | 1 |
*Nombre de cycles recommandé en fonction des données d'entrée :
| ADN d'entrée(ADN fragmenté) | Nombre de cycles PCR |
| 1ng | 13-15 |
| 10ng | 9-11 |
| 25ng | 7-9 |
| 50ng | 6-7 |
| 100ng | 5-6 |
| 250ng | 4-5 |
| 500ng | 3-4 |
| 1000ng | 2-3 |
Notes
1. Il est recommandé de préparer tous les composants de la réaction sur glace, car l'activité exonucléase 3'-5' du mélange PCR HiFi 2× pour NGS à température ambiante entraînera une dégradation des amorces ;
2. Tous les composants doivent être bien mélangés et centrifugés immédiatement avant utilisation.
3. La polymérase est spécialement développée pour le système de préparation et d'amplification de bibliothèques NGS.
4. Pour le clonage et d'autres aspects de l'amplification, veuillez sélectionner d'autres enzymes d'amplification moléculaire.