Endonucléase de restriction BsaI HYJ110
L'endonucléase de restriction BsaI est une protéine mutante codée par un gène de Bacillus stearothermophilus exprimé de manière recombinante chez Escherichia coli. C'est une endonucléase de restriction de classe IIS qui reconnaît des sites spécifiques avec la même spécificité que l'enzyme native, mais avec une activité STAR réduite. Sa séquence de reconnaissance et son site de clivage sont les suivants :
5'······GGTCTC(N)················3'
3'······CCAGAG(NNNNN)······5
Composants
| Composants | 1KDANS | 5KU | 20 KU | 200KU | 2000KU |
| BsaI (20 U/μL) | 50 µL | 250 µL | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
| Tampon 10×BsaI | 1,25 mL | 1,25 mL | 4 × 1,25 mL | 5 × 10 mL | 5 × 100 mL |
Stockage
À conserver entre -25 °C et -15 °C. À consommer de préférence avant le 1er janvier 2021 (éviter les cycles de congélation-décongélation répétés).
tampon de stockage
Tris-HCl 10 mM, NaCl 200 mM, DTT 1 mM, EDTA 0,1 mM, albumine recombinante 200 µg/ml,
50 % de glycérol. (pH 7,4 à 25 °C).
Définition de l'activité
Une unité d'activité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour cliver complètement 1 μg d'ADN de contrôle interne dans une réaction de 50 μL à 37 °C en 1 heure.
Contrôle de qualité
1. Pureté des protéines (SDS-PAGE) : La pureté de BsaI était ≥95% telle que déterminée par analyse SDS-PAGE.
2. Activité RNase :20 U de ce produit et 1,6 μg d'ARN MS2 ont réagi à 37 °C pendant 16 heures, ce qui n'a entraîné aucun changement dans la bande électrophorétique de l'ARN.
3. Activité DNase non spécifique : 20 U de ce produit et 1 μg d'ADN PhiX174 ont réagi à 37 °C pendant 16 heures, ce qui n'a donné lieu à aucune bande électrophorétique d'ADN en excès.
4. Test de digestion enzymatique-ligation-re-digestion : 1 μg d'ADN λ/HindIII a été digéré avec 20 U de ce produit à 16 °C en présence d'une quantité appropriée de ligase T4. Les produits de digestion peuvent être religués. Après récupération, les produits de ligation peuvent être clivés à nouveau à l'aide de la même endonucléase.
5. Test de détection de l'ADN résiduel d'E. coli : 2 U d'acide nucléique restant dans ce produit ont été détectés par qPCR TaqMan spécifique de l'ADNr 16S d'E. coli, et le génome d'E. coli est resté à ≤1 copie.
6. Endotoxine : Test LAL, Pharmacopée chinoise, édition 2020, partie IV, test de limite de gel, règles générales (1143), teneur en endotoxines bactériennes ≤ 10 UE/mg