Endonucléase de restriction BspQ I HYJ111
L'endonucléase de restriction BspQ I est une protéine recombinante codée par le gène BspQ I de Bacillus sphaericus et exprimée de manière recombinante chez Escherichia coli. C'est une endonucléase de restriction de classe IIS qui reconnaît des sites spécifiques. Sa séquence de reconnaissance et son site de clivage sont les suivants :
5'······GTCCTTC(N)·················3'
3'······CGAGAAG(NNNN)······5'
Composants
| Composants | 0,5KDANS | 2.5KU | 10KU | 100KU | 1000KU |
| BspQ I (10 U/μL) | 50 µL | 250 µL | 1 mL | 10 mL | 100 mL |
| Tampon 10×BspQ I | 1,25 mL | 1,25 mL | 4 × 1,25 mL | 5 × 10 mL | 5 × 100 mL |
Stockage
À conserver entre -25°C et -15°C, valable 2 ans.
tampon de stockage
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM dithiothréitol, 500 µg/ml d'albumine recombinante, 0,1 % de Triton X-100 et 50 % de glycérol (pH 7,0 à 25 °C).
Définition de l'activité
Une unité d'activité est définie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour cliver complètement 1 μg d'ADN de contrôle interne dans une réaction de 50 μL à 50 °C en 1 heure.
Contrôle de qualité
1. Pureté des protéines (SDS-PAGE) : La pureté de BspQ I était ≥95% telle que déterminée par analyse SDS-PAGE.
2. Activité RNase : 10 U de ce produit ont réagi avec 1,6 μg d'ARN MS2 à 50 °C pendant 4 heures, sans que cela n'entraîne de changement dans les bandes électrophorétiques de l'ARN.
3. Activité DNase non spécifique : 10 U de ce produit ont réagi avec 1 μg d'ADN λ à 50 °C pendant 16 heures, ne donnant lieu à aucune bande d'ADN en excès par rapport à une réaction d'une heure à 50 °C.
4. Test de digestion enzymatique-ligation-re-digestion : Dix unités de ce produit ont été utilisées pour digérer 1 μg d'ADN λ à 16 °C avec une quantité appropriée de ligase T4. Les produits de digestion ont ensuite été religués et clivés à nouveau à l'aide de la même endonucléase.
5. Dosage de l'ADN résiduel d'E. coli : Un test qPCR TaqMan spécifique de l'ADNr 16S d'E. coli a été réalisé. Résidu génomique ≤ 0,1 pg/ul ;
6. Résidu de protéine hôte : ≤ 50 ppm ;
7. Endotoxine bactérienne (Endotoxine) :Test LAL, Pharmacopée chinoise édition 2020, Partie IV, Test de limite de gel, Règles générales (1143), teneur en endotoxines bactériennes ≤ 10 UE/mg ;