ADN polymérase Warm Start Bst 2.0 (sans glycérol, haute densité)
Français L'ADN polymérase Bst 2.0 à démarrage à chaud (sans glycérol, haute densité) est dérivée de l'ADN polymérase I de Bacillus stearothermophilus, qui a une activité ADN polymérase 5'→3' et une forte activité de remplacement de chaîne, mais aucune activité exonucléase 5'→3'. L'ADN polymérase Bst V2 est idéalement adaptée au déplacement de brin, à l'amplification isotherme LAMP (amplification isotherme à médiation par boucle) et au séquençage rapide. Cette ADN polymérase Bst V2 est capable d'inhiber l'activité de l'ADN polymérase à température ambiante, de sorte qu'elle peut être utilisée et le système réactionnel peut être formulé à température ambiante, empêchant l'amplification non spécifique et améliorant l'efficacité de la réaction, et cette version peut être lyophilisée. De plus, elle est capable de libérer son activité à des températures élevées, éliminant ainsi le besoin d'une étape d'activation séparée.
Composants
| Composant | 1600U | 8000U | 80000U |
| ADN polymérase Bst V2 (sans glycérol) (32U/μL) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| Tampon 10×HC Bst V2 | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 mL |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Applications
1.Amplification isotherme LAMP
2.Réaction de déplacement simple d'un brin d'ADN
3.Séquençage de gènes à GC élevé
4.Séquençage de l'ADN au niveau du nanogramme.
Conditions de stockage
Transport à une température inférieure à 0°C et stockage à -25°C~-15°C.
Définition de l'unité
Une unité est définie comme la quantité d'enzyme qui incorpore 25 nmol de dNTP dans un matériau insoluble dans l'acide en 30 minutes à 65 °C.
Réaction LAMP
| Composants | 25μLSystème |
| Tampon 10×HC Bst V2 | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10 mM chacun) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Vert (25×)un | 1,0 μL |
| Mélange d'apprêtb | 6 μL |
| ADN polymérase Bst V2 (sans glycérol) (32 U/uL) | 0,25 μL |
| Modèle | × μL |
| ddH₂O | Jusqu'à 25 μL |
Remarques :
1) a. SYTOTM 16 Vert (25×) : Selon les besoins expérimentaux, d’autres colorants peuvent être utilisés comme substituts ;
2) b. Mélange d'amorces : obtenu en mélangeant 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB et d'autres volumes.
Réaction et condition
1 × tampon HC Bst V2, la température d'incubation est comprise entre 60°C et 65°C.
Inactivation par la chaleur
80°C, 20min.
