Kit ELISA CHO HCP (ELISA en une étape) HYI111
Ce kit utilise une culture cellulaire CHO (K1&S) en mode fed-batch pour produire des protéines de cellules hôtes (HCP), lesquelles servent à la génération d'anticorps spécifiques par immunisation de moutons. Le kit emploie un test immuno-enzymatique (ELISA) en phase solide, avec une technique de sandwich à double anticorps, pour détecter les HCP résiduelles dans l'échantillon. Un anticorps polyclonal spécifique des HCP CHO a été utilisé pour capturer les HCP restantes. L'étalon de calibration (ou l'échantillon à tester) et l'anticorps anti-HCP CHO marqué à la peroxydase de raifort (HRP) ont été ajoutés simultanément à la plaque de microtitration, préalablement recouverte de l'anticorps de capture purifié par affinité. Après incubation et lavage, le substrat TMB (3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine) a été ajouté pour la réaction. La HRP a catalysé l'oxydation du TMB par H₂O₂.2LE2On obtient ainsi un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). L'ajout d'une solution d'arrêt interrompt la réaction enzymatique, ce qui donne un produit jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à 450 nm sont positivement corrélées à la concentration en protéines de la chaîne lourde (HCP) dans la solution étalon et l'échantillon. La concentration en HCP de CHO dans l'échantillon peut être calculée à partir de la courbe dose-réponse. Aucun traitement particulier n'est requis pour l'échantillon et sa conformité peut être vérifiée par dilution appropriée avec le kit.
Applications
Ce kit est destiné à la détection des protéines de cellules hôtes (PCH) dans les produits obtenus par expression dans des cellules hôtes CHO, tels que les anticorps monoclonaux, les protéines recombinantes, les vaccins, etc. Ce kit est réservé à la recherche et ne doit pas être utilisé en clinique.
Figure 1. Schéma
Composants
| Réactif | Quantité | Notes |
| CHO HCP Étalon de calibration | 2 bouteilles | Poudre lyophilisée. Dissoudre dans 500 µL de solution de reconstitution et laisser reposer environ 5 minutes. La solution doit être limpide et transparente. Consulter l'étiquette du flacon pour plus de détails. |
| Anti-CHO HCP Bandes de microtitration | 8 puits × 12 bandes | Bandelettes pré-enduites d'anticorps d'affinité anti-CHO HCP de mouton, conditionnées sous vide avec un dessiccant. Refermer et conserver immédiatement après utilisation. |
| Solution de reconstitution | 1 × 1,5 mL | Utilisé uniquement pour dissoudre l'étalon de calibration CHO HCP. |
| Diluant | 2 × 25 mL | Pour la dilution de l'étalon de calibration, Anti-CHO:HRP (100×) et des échantillons. |
| Concentré de tampon de lavage (10×) | 2 × 25 mL | Il cristallise facilement à basse température et peut être dissous dans un bain-marie à 37 °C avant utilisation. Diluer à 1:10 avec de l'eau ultrapure fraîchement préparée pour le lavage des plaques. |
| Anti-CHO:HRP (100×) | 1×120 μL | Anticorps de mouton purifié par affinité et conjugué à la peroxydase de raifort (HRP). Diluer 100 fois avant utilisation. |
| Substrat TMB | 1×12 mL | Laisser équilibrer à température ambiante pendant 20 minutes. quelques minutes avant utilisation. Conserver à l'abri de la lumière et dans un récipient hermétique. |
| Solution d'arrêt | 1×6 mL | Acide chlorhydrique 1 M. Éviter tout contact direct avec les yeux, la peau et les vêtements. |
| Film de scellage | 3 pièces | Recouvrir les bandelettes avec ce matériau pendant l'incubation afin d'éviter toute contamination et l'évaporation du liquide. |
Remarque : La température ambiante fait référence à 25 °C.±3℃.
Conditions de stockage
Conserver le kit entre 2 et 8 °C. Utiliser avant la date de péremption indiquée sur l'emballage. Les composants ouverts doivent être conservés comme suit.
Tableau 2. Conditions de stockage recommandées pour les composants ouverts
| Composant | Stabilité |
| Bandes de microtitration anti-CHO HCP | Conserver dans le sachet avec un dessiccant à une température de 2 à 8 °C pendant 60 jours maximum. |
| CHO HCP reconstitué Étalon de calibration | Conserver entre 2 et 8 °C pendant 30 jours maximum ou à une température inférieure à -20 °C et sans plus de 3 cycles de gel-dégel. |
Matériel nécessaire mais non fourni dans le kit
1. Tubes à centrifuger stériles pour dilution
2. Papier absorbant pour le séchage des assiettes
3. Embouts de pipettes
4. Réservoirs de réactifs multicanaux (50 mL)
Équipements connexes
1. Lecteur de microplaques capable de mesurer l'absorbance à 450 nm, avec la longueur d'onde de correction réglée entre 620 nm et 650 nm.
2. Pipettes monocanal ou multicanaux
3. Thermoagitateur pour microplaques
4. Incubateur (facultatif)
5. Laveuse à plaques (en option)