Désoxyribonucléase I (DNase I), HYC116 de qualité GMP
La DNase I est une endonucléase capable de digérer l'ADN simple brin et double brin pour produire des désoxynucléotides simples ou des oligodésoxynucléotides simple brin ou double brin. Elle hydrolyse la liaison phosphodiester pour produire des monodésoxynucléotides et des oligodésoxynucléotides contenant des groupes phosphate en 5' et hydroxyle en 3'. Le produit de digestion moyen est le plus petit polytétranucléotide. La DNase I peut catalyser de nombreuses formes d'ADN, telles que l'ADN simple brin, l'ADN double brin et même la chromatine (son taux de clivage est influencé par les histones). Son pH optimal se situe entre 7 et 8. L'activité de la DNase I dépend du Ca²⁺.+ et peut être activé par des ions métalliques divalents, tels que le Co2+, Mn²+, Zn²+, etc. 5 mM Ca²+ peut protéger l'enzyme de l'hydrolyse. En présence de Mg²⁺+, l'enzyme peut reconnaître et couper n'importe quel site sur n'importe quel brin d'ADN de manière aléatoire ; et en présence de Mn²+Ce produit peut reconnaître simultanément deux brins d'ADN et les couper quasiment au même endroit, formant ainsi des extrémités franches ou des extrémités cohésives avec 1 à 2 nucléotides en saillie. Fabriqué conformément aux exigences des bonnes pratiques de fabrication (BPF), il est fourni sous forme liquide.
Composants
| Composants | 500 U | 2000 DANS | 10000 U |
| Désoxyribonucléase I (DNase I), qualité BPF | 250 μL | 1 mL | 5 mL |
Stockage
Conserver à -15°C ~ -25°C pendant un an.
Définition de l'unité
Quantité d'enzyme nécessaire pour dégrader complètement 1 µg d'ADN plasmidique en 10 min à 37 °C. (Le tampon de réaction est composé de Tris-HCl 10 mM, pH 7,6, et de MgCl₂ 2,5 mM.)2,0,5 mM CaCl₂, 1 μg d'ADN plasmidique)
Spécification
| Source | Recombinant E. coliavec le gène DNase I |
| Température optimale | 37℃ |
| Tampon de stockage | Tris-HCl 10 mM, pH 7,6, CaCl₂ 2 mM2, 50 % (v/v) glycérol |
Instructions
1. Digestion de la matrice plasmidique
1) Système réactionnel :
Utilisez le tube à centrifuger sans RNase et l'embout de pipette pour préparer le système réactionnel suivant :
| Composants | Volume |
| Tampon DNase I 10×* | 1 μL |
| DNase I | 1 μL |
| ARN | X |
| ddH₂O sans RNase | Jusqu'à 10 μL |
Tampon DNase I 10× : Tris-HCl 10 mM, MgCl₂ 2,5 mM2, 0,5 mM CaCl2, pH 7,6 à 25 °C.
2) Conditions de réaction :
À 37 °C, 15 à 30 minutes plus tard, ajouter une solution d'EDTA à une concentration finale de 2,5 mM et bien mélanger à 65 °C pendant 10 minutes. Le gabarit ainsi traité peut être utilisé dans des réactions ultérieures telles que la réaction de coiffage.
2. Inhibition de l'inactivation de la DNase I
L'ajout d'EDTA à une concentration finale de 2,5 mM, suivi d'un chauffage à 65 °C pendant 10 minutes, permet d'inactiver la DNase I. L'extraction au phénol et au chloroforme inactive également la DNase I. Les conditions suivantes exercent un effet inhibiteur significatif sur la DNase I : agents chélateurs d'ions métalliques, ions zinc à une concentration de l'ordre du millimole/litre, SDS à 0,1 %, DTT, β-mercaptoéthanol et autres agents réducteurs, ainsi que des concentrations salines supérieures à 50-100 mM.
Applications
Préparation d'ARN sans ADN ; élimination de l'ADN matrice après transcription in vitro ; préparation d'ARN sans ADN avant les réactions RT-PCR et RT-qPCR ; combinaison avec l'ADN polymérase I pour effectuer le marquage de l'ADN par translocation de coupure ; construction d'une bibliothèque de fragmentation d'ADN.
Notes
1. Les enzymes doivent être conservées dans une glacière ou dans un bain de glace lors de leur utilisation, et doivent être stockées à -20℃ immédiatement après utilisation.
2. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter un équipement de protection individuelle (EPI), tel qu'une blouse de laboratoire et des gants jetables, lorsque vous utilisez ce produit.