Kit ELISA E. coli HCP (ELISA en une étape) HYI112
Ce kit utilise un test immuno-enzymatique en phase solide (ELISA) avec une technique de sandwich à double anticorps pour détecter les résidus E. coli(Souches d'expression protéique) protéines de cellules hôtes (HCP) dans l'échantillon. Anticorps polyclonal spécifique à E. coli Des souches d'expression protéique (HCP) ont été utilisées dans le test pour capturer les HCP restantes dans l'échantillon. L'étalon de calibration (ou l'échantillon test) et la HRP (peroxydase de raifort) marquée avec un anticorps anti-E. coli Des anticorps anti-HCP (souches d'expression protéique) ont été ajoutés simultanément à la plaque de microtitration pré-enduite, suivis d'étapes d'incubation et de lavage. Le substrat TMB (3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine) a ensuite été ajouté pour la réaction, et la HRP a catalysé l'oxydation du TMB par H₂O₂.2LE2pour produire un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). Ensuite, la solution d'arrêt est ajoutée pour stopper la réaction enzymatique, ce qui donne un produit de couleur jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à 450 nm étaient positivement corrélées à la concentration en HCP dans l'étalon et l'échantillon. La concentration deE. coliLe nombre de souches exprimant des protéines dans l'échantillon peut être calculé à l'aide de la courbe dose-réponse. Aucun traitement particulier n'est requis pour l'échantillon et sa conformité peut être vérifiée par les dilutions appropriées, grâce à ce kit.
Applications
Ce kit est destiné à la détection de protéines de cellules hôtes (PCH) dans des produits issus de l'expression de bactéries E. coli dérivées de BL21, telles que l'interleukine (IL), l'interféron humain recombinant (rhIFN), le facteur de stimulation des colonies de granulocytes-macrophages humain recombinant (rhGM-CSF), le facteur de nécrose tumorale humain recombinant (rhTNF), les facteurs de croissance (EGF/FGF/PDGF), etc. Ce kit est réservé à la recherche et ne doit pas être utilisé en clinique.
Figure 1. Schéma
Composants&Conditions de stockage
| Réactif | Quantité | Notes |
| E. coli HCP-E Étalon de calibration | 2 bouteilles | Poudre lyophilisée. Dissoudre dans 500 µL de solution de reconstitution et laisser reposer environ 5 minutes jusqu'à obtention d'une solution transparente. Se référer aux instructions figurant sur l'étiquette du tube. |
| Anti-E.coli HCP-E Bandes de microtitration | 8 puits × 12 bandes | Bandelettes pré-enduites d'anticorps anti-E. coli (souches d'expression protéique) de mouton, à affinité pour les protéines de la cellule hôte (HCP), conditionnées sous vide avec un dessiccant. Bien refermer et conserver immédiatement après utilisation. |
| Solution de reconstitution | 1 × 1,5 mL | Utilisé uniquement pour dissoudre l'étalon de calibration E. coli HCP-E. |
| Diluant | 2 × 25 mL | Pour la dilution de l'étalon de calibration, Anti-E.coli-E:HRP (100×) et des échantillons. |
| Concentré de tampon de lavage (10×) | 2 × 25 mL | Il cristallise facilement à basse température et se redissout dans un bain-marie à 37 °C avant utilisation. Diluer 10 fois avec de l'eau ultrapure fraîchement préparée pour le lavage des plaques. |
| Anti-E.coli HCP-E:HRP (100×) | 1×120 μL | L'anticorps de mouton purifié par affinité et conjugué à la HRP doit être dilué 100 fois dans le diluant. |
| Substrat TMB | 1×12 mL | Laisser s'équilibrer à température ambiante pendant 20 minutes avant utilisation. Bien refermer et conserver à l'abri de la lumière. |
| Solution d'arrêt | 1×6 mL | Acide chlorhydrique 1 M. Éviter tout contact direct avec les yeux, la peau et les vêtements. Porter des lunettes de protection lors de la manipulation. |
| Film de scellage | 3 pièces | Recouvrir les bandelettes avec ce matériau pendant l'incubation afin d'éviter toute contamination et l'évaporation du liquide. |
Remarque : La température ambiante fait référence à 25 °C.±3℃.
Conditions de stockage
Conserver le kit entre 2 et 8 °C. Utiliser avant la date de péremption indiquée sur l'emballage. Les composants ouverts doivent être conservés comme suit.
Tableau 2. Conditions de stockage recommandées pour les composants ouverts
| Composant | Stabilité |
| Anti-E. coli HCP-E Bandes de microtitration | Conserver dans le sachet avec un dessiccant à une température de 2 à 8 °C pendant 60 jours maximum. |
| reconstitué E. coli HCP-E Étalon de calibration | À conserver entre 2 et 8 °C pendant 30 jours maximum. |
Matériel nécessaire non inclus dans le kit
1. Tubes à centrifuger stériles pour dilution
2. Papier absorbant propre pour sécher les assiettes
3. Embouts de pipette
4. Réservoirs de réactifs multicanaux (50 mL)
5. Thermoagitateur pour microplaques
6. Incubateur (facultatif)
7. Rondelle d'assiette (en option)
Équipements connexes
1. Lecteur de microplaques capable de mesurer l'absorbance à 450 nm, avec la longueur d'onde de correction réglée entre 620 nm et 650 nm.
2. Pipettes monocanal ou multicanaux