Kit ELISA HEK293 HCP (ELISA en une étape) HYI110
Ce kit utilise un test immuno-enzymatique (ELISA) en phase solide, avec une technique de sandwich à double anticorps, pour détecter les protéines de cellules hôtes (HCP) résiduelles issues des cellules HEK293 dans l'échantillon. Un anticorps polyclonal spécifique des HCP HEK293 a été utilisé pour capturer les HCP restantes. L'étalon de calibration (ou l'échantillon à tester) et l'anticorps anti-HCP HEK293 marqué à la peroxydase de raifort (HRP) ont été ajoutés simultanément à la plaque de microtitration, préalablement recouverte de l'anticorps de capture purifié par affinité. Après incubation et lavage, le substrat TMB (3,3',5,5'-tétraméthylbenzidine) a été ajouté à la réaction. La HRP a catalysé l'oxydation du TMB par H₂O₂.2LE2 On obtient ainsi un produit bleu (pic d'absorption maximal à 655 nm). L'ajout d'une solution d'arrêt interrompt la réaction enzymatique, ce qui donne un produit jaune (pic d'absorption maximal à 450 nm). Les valeurs d'absorbance à 450 nm sont positivement corrélées à la concentration en protéines de la cellule hôte (HCP) dans la solution étalon et dans l'échantillon. La concentration en HCP dans l'échantillon peut être calculée à partir de la courbe dose-réponse. Aucun traitement particulier n'est requis pour l'échantillon, et sa conformité peut être vérifiée par dilution appropriée avec le kit.
Préparation
A. Équilibrage
1. Avant utilisation, laisser le kit s'équilibrer à température ambiante pendant 20 minutes ; revenir à 2-8℃ après utilisation.
2. Prélevez la quantité appropriée de bandelettes et placez-les dans un porte-bandelettes conformément au plan de l'expérience. Conservez les bandelettes restantes dans le sachet avec un dessiccant à une température de 2 à 8 °C.
B. Préparation des réactifs
1. Solution étalon de calibration HEK293 HCP : Pipeter 500 µL de solution de reconstitution dans le flacon contenant la solution étalon de calibration HEK293 HCP. Inverser délicatement le flacon pour mélanger et laisser reposer 5 minutes. Conserver la solution restante dans les conditions recommandées.
Remarque : Ne pas utiliser d'autres volumes de solution de reconstitution pour dissoudre l'étalon de calibration.
2. Solution tampon de lavage 1× : Diluer la solution tampon de lavage concentrée (10×) au 1/10 avec de l’eau ultrapure. Par exemple, ajouter 25 ml de solution tampon de lavage concentrée (10×) à 225 ml d’eau ultrapure pour obtenir 250 ml de solution tampon de lavage 1×. Préparer la solution extemporanément et bien mélanger avant utilisation. Ce produit peut être acheté séparément.
Remarque : Si le concentré de tampon de lavage (10×) ou le diluant est trouble ou contient des précipités, chauffer à 37℃ jusqu'à ce que ça disparaisse.
3. 1×Anti-HEK293:HRP : Préparer la solution 1×HEK293:HRP en diluant l’Anti-HEK293:HRP (100×) avec le diluant dans un tube à centrifuger stérile. Mélanger délicatement la solution et l’utiliser immédiatement.
Remarque : L’Anti-HEK293:HRP (100×) doit s’équilibrer à température ambiante pendant 20 minutes, puis être remis en place. à 2-8℃ après utilisation.
C. Préparation des solutions étalons
1. Veuillez préparer les solutions étalons d'étalonnage HEK293 HCP conformément à la figure et au tableau ci-dessous.
D. Préparation des échantillons
1. Échantillons d'essai : échantillons en cours de fabrication, substance médicamenteuse et produit fini. Les échantillons doivent être limpides et transparents, et les substances insolubles doivent être éliminées par centrifugation ou filtration.
2. Réaliser des études de stabilité des échantillons afin de prévenir toute dégradation ou dénaturation pendant l'expérience. Un stockage à long terme à -70 °C est recommandé pour éviter toute dégradation, ainsi que les cycles de congélation-décongélation répétés.
3. Diluer les échantillons avec un diluant approprié pour obtenir une concentration de protéines de cellules hôtes (HCP) dans la plage de quantification de la courbe d'étalonnage.
4. Il est recommandé de vérifier l'adéquation de l'échantillon en déterminant le facteur de dilution approprié avant le test initial, ce qui facilitera les tests de routine ultérieurs. Remarque : Veuillez nous contacter pour obtenir de l'aide concernant le protocole de validation.