ADN polymérase Hifi HS I HYD614
L'ADN polymérase Hifi HS I est une ADN polymérase thermostable de haute fidélité, obtenue par évolution dirigée en ingénierie enzymatique. Elle présente une activité exonucléase 3'→5' extrêmement forte et un taux d'erreurs d'appariement extrêmement faible lors de la PCR. Grâce à une modification par anticorps spécifique, elle est dépourvue d'activité polymérase 5'→3' et d'activité exonucléase 3'→5' à température ambiante, permettant ainsi une PCR à chaud hautement spécifique. Le tampon contient des facteurs auxiliaires d'extension pour maintenir la stabilité et l'efficacité du processus d'amplification, et permet de réaliser facilement le clonage de gènes conventionnel, l'amplification de longs fragments et d'autres expériences.
Composants
| Composants | 100U | 500U | 1000U |
| ADN polymérase Hifi HS I (1000 U/mL) | 100 μL | 500 μL | 500 μL × 2 |
| Tampon HiFi 5× I | 1000 μL | 1000 μL × 5 | 1000 μL × 10 |
Stockage
Conserver à -20 °C. Bien mélanger avant utilisation et éviter les cycles répétés de congélation et de décongélation.
Instructions
1. Préparation du système de réaction PCR
| Composition | Volume |
| Modèle | X µL |
| Amorce 1 (10 µM) | 2 µL |
| Amorce2 (10 µM) | 2 µL |
| Tampon HiFi 5× I | 10 µL |
| ADN polymérase Hifi HS I | 1 |
| ddH2LE | Jusqu'à 50 |
2. procédure d'amplification PCR
| Étape | Température | Temps | Cycles |
| dénaturation initiale | 95 °C | 3 minutes | 1 |
| Dénaturation | 98 °C | 10 s | 25-35 |
| recuit | 60 °C* | 15 s | |
| Extension | 72 °C | 1 min/Kb** | |
| Entièrement déployé | 72 °C | 5 min | 1 |
| Prise | 4 °C | ∞ | 1 |
*Ajustez la température de recuit en fonction de la valeur Tm de l'apprêt ; le réglage recommandé est de 60 °C.
**Pour l'amplification de fragments inférieurs à 10 Ko, réglez le délai à 1 min/Ko. Pour l'amplification de fragments de 10 à 20 Ko, réglez la durée totale d'extension à 10 min.
Notes
1. Ce produit est destiné uniquement à la recherche scientifique.
2. Veuillez utiliser des modèles de haute qualité.
3. L'ADN polymérase Hifi HS I est modifiée par des anticorps monoclonaux. Le système réactionnel peut être préparé à température ambiante, mais l'enzyme et le tampon doivent être placés sur glace avant utilisation et conservés à -20 °C après utilisation.
4. La conception de l'amorce doit respecter les principes généraux. Si l'extrémité 5' présente une séquence modifiée, c'est-à-dire une séquence non appariée à la matrice, elle ne sera pas prise en compte dans le calcul de la valeur Tm.